东盛|为什么RNA容易降解（文末重磅福利）

    在提取生物总RNA的过程中，被提取的RNA主要包含三类——rRNA，tRNA，和mRNA。

    无论是在真核生物细胞中还是在原核生物细胞中，80%-85%的RNA都是rRNA，即核糖体RNA，是组成核糖体的主要成分。

    原核生物的核糖体所含的rRNA有5S rRNA、16S rRNA、23S rRNA三种。

    真核生物的核糖体所含的rRNA有5S rRNA、5.8S rRNA、18S rRNA、28S rRNA四种。

    从真核生物中提取到的RNA大部分都是大片段的18S rRNA、28S rRNA，而5S rRNA、5.8S rRNA、tRNA由于分子量较小，所以比较难回收到。

    如果5S RNA位置的条带亮度很高，则表示18S rRNA、28S rRNA出现降解。

为什么RNA容易降解呢？

首先，RNA是单链结构，不像DNA双链结构那么稳定。其次，无论是内源性的RNA酶还是外源性的RNA酶都非常多，且活性强。

RNA酶（RNase）是一种内切核糖核酸酶，可以在C和U残基位置特异性降解单链RNA。RNA酶是一种小分子的蛋白，且结构中具有二硫键，因此非常稳定，热变性后可以很快恢复构象。

RNA酶是生物进化出的一种防御机制，用来防御外源RNA的入侵。外源RNA的转录和翻译会给细胞带来致命性的伤害。因此，生物都分泌出大量的RNA酶，如人体的唾液、眼泪以及皮肤表面都布满了RNA酶，被接触过的物体上也存留着稳定的RNA酶。

因此，在提取RNA的过程中要注意严格防止RNA酶的降解。可从以下几方面控制：

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    超低温抑制RNA酶活性

    离体的组织存放于超低温环境中，不要进行解冻处理。使用大量液氮充分研磨样品。使用低温离心机进行离心。

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    DEPC处理抑制RNA酶活性

    DEPC(焦碳酸二乙酯)通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。枪头、离心管等可以使用0.1% DEPC浸泡后高压灭菌。

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    在提取过程中，要穿实验服、戴口罩，尤其是手套一定要是全新干净的，并在实验过程中经常更换。避免在操作过程中说话。

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    使用75%的酒精喷洒台面和手套，可以抑制RNA酶活性

电泳过程中RNA染色不均匀也会让人误以为RNA降解了

 

    当RNA上样量过大时，染料不足以结合全部的RNA，会优先结合小片段，因此大部分染料被5S rRNA区结合，而18S rRNA、28S rRNA不能被充分染色，会出现类似于降解严重的现象。

    这时应当减少上样量，或者采用后染法染色。

    东盛生物RNA提取专用裂解液TRAzol中含有异硫氰酸胍，可以高效抑制RNase活性，保证在提取过程中RNA的完整性。注意样本不要过量，否则样本不能被彻底裂解，RNase也不足以被全部抑制，从而导致提取的RNA被降解。

    东盛生物通用RNA提取试剂盒同样可以高效抑制RNase活性，搭配硅胶纯化柱进行提纯，操作简单，产物纯度高，得率稳定。