小鼠剖腹产技术

剖腹产技术是培养无菌小鼠、悉生小鼠和SPF小鼠的必备技术。虽然用药物方法能排除小鼠体内外各种病源或非病源性微生物，但很难达到彻底排除的目的，且由于使用药物将可能影响以后的某些动物实验结果，故这种方法不科学，而剖腹产技术才是培养无菌小鼠、悉生小鼠、SPF小鼠的必经途径。

剖腹产技术起源于十九世纪后期，近年来随着各门科学技术的发展，实验动物工作得到迅速的发展。开放条件下饲养的普通动物由于其实验时的一致性和重复性差，用这种普通动物做实验对实验及实验结果的准确性有很大的影响，而SPF动物、悉生动物和无菌动物用于动物实验，其重复性和一致性比较好，故已成为必备实验动物(而开放条件下饲养的小鼠只能做教学用)，这样，剖腹产技术显得更加重要了。

剖腹产技术是净化动物的一个手段。它能排除普通动物所携带的一切微生物和寄生虫(包括细菌、衣原体、支原体、立克次体、螺旋体、真菌、放线菌和大部分病毒与寄生虫，排除能经胎盘垂直感染的病毒和寄生虫)。

小鼠剖腹产是指在无菌室内，将临近分娩的鼠处死(或麻醉)，经无菌手段剖腹取出子宫并做好结扎，再将子宫通过消毒槽进入剖腹产隔离器，然后再剖开子宫取出小鼠。小鼠剖腹产技术实际是指子宫摘除术的意思，而大动物才是名副其实的剖腹产。

 一、器材与条件

1．整个操作环境必须在35℃～37℃，最好能保持37℃。

2．整个操作最好在无菌室内，这样能减少污染的机会。

3．无菌室、剖腹手术隔离器、手术器械，主要是眼科剪子和镊子，脱脂棉(消毒过)、电热切刀、牙签、过氧乙酸、新洁尔灭等。

二、操作步骤

1．如果不采用人工哺乳方法(附人工哺乳，乳汁配制方法)采用代乳鼠代乳，做剖腹产的母鼠，应晚于隔离器中的代乳鼠1～2d交配妊娠(以检查阴栓为准)。

2．隔离器中的代乳鼠产后1～2d，做剖腹产取新生幼鼠。对做剖腹产的母鼠应做好剖腹产前的检查，以防剖腹产时过早或过晚。

3．处死或麻醉的做剖腹产的母鼠应在消毒液中浸泡2min左右。

    消毒灭菌液：

    A 福尔马林    20％

    季铵     5％

    苄烷氨水    75％

    B     过氧乙酸    2％

    C     碘酊     5％(也有人主张采用腹部碘酊消毒灭菌)    

4．做剖腹产母鼠的处死方法，一般都主张采用颈椎脱位法处死，也有人主张用氟烷吸入麻醉(大动物只有这种方法)，都不主张用化学药物以免给胎儿带来不良影响。处死时要迅速，避免强烈挣扎。

5．将处死的妊娠鼠固定，并剖开腹腔，显露子宫，以外科结扎子宫颈(和输卵管)，取下子宫，进入过渡槽中。通过过度槽移入隔离器中。

6．过渡槽中的消毒灭菌液：

    A    过氧乙酸    0.2％

    B    新洁尔灭    0.5％

7．在隔离器中用剪子剪开子宫壁，分离开胎盘取出胎儿，用消毒纱布(棉)擦拭鼻口及全身并促使呼吸，然后用电热刀切断脐带。

8．以上整个剖腹产过程所用的时间不要超过10min，然后将剖腹所得到的新生儿进行人工哺乳或转送给代乳鼠，送给时应与其代乳鼠用的垫料相混或与乳鼠接触，使其气味相同，便于代乳。

9．剖腹产后得到的新仔鼠，在经微生物监测确认无污染时，经过传递筒，传送到饲养繁殖隔离器中。在没有无菌代乳鼠时，常需要经过数代连续剖腹产术后，才能获得无菌鼠，通过代乳鼠方法可建立其他品系的无菌动物。