如何选择血液DNA提取试剂

目前，主流的血液DNA提取方法有磁珠法和硅胶膜离心柱法，这两种方法各有利弊。磁珠法可以针对大批量样本的处理，满足自动化工作的需要，但是提取核酸纯度低，提取得率低；硅胶膜离心柱法提取的核酸纯度高，提取效率高，对目标基因或DNA含量较低的样本提取，具有比较明显的优势，但不易自动化操作。一般来说，科研用户的样本量不会太多，首要的还是提高核酸纯度和提取效率，因而科研用户主要还是选择离心柱法。大型医疗机构样本量较多，一般都会选择自动化的磁珠法。但一些样本量不太多的临床医院或检测机构，出于方便和准确诊断的要求，还是会选择离心柱法。特别地，对一些低丰度样本的检测，最好不要用磁珠法，最好选择离心柱法，否则可能会导致假阴性结果。就离心柱法来说，目前使用较多的还是商品化试剂盒，面对众多的品牌，如何选择适合自己实验的提取试剂呢？

1. 血液核酸提取的得率要高。全血中提取基因组DNA实际上就是从有核的白细胞中提取DNA，通常利用红细胞与白细胞膜结构的差异，先使红细胞裂解，离心后收集白细胞；再裂解白细胞，使膜蛋白和核蛋白变性，释放出DNA，再将DNA提取出来。血液核酸提取得率的高低，对离心柱法而言，主要取决于离心柱对核酸的吸附能力和洗脱能力以及裂解液的裂解消化能力。离心柱的硅胶膜DNA吸附性能好、裂解液消化能力强、洗脱液洗脱能力好，血液核酸提取的得率就高。如果离心柱硅胶膜吸附能力不好，裂解液和洗脱液没有经过很好的优化，血液DNA提取的得率就不高。至于血液DNA提取得率的确定，我们可以使用紫外分光光度法，但是不能作为判断得率的唯一标准，最好还是要做个PCR或荧光定量。血液的量与提取的核酸量成正比，如果要提高血液核酸得率，可通过增加血液的量来实现。一般先提取200ul的全血，如结果不理想可考虑增加血液量。但如果增加血液量还不能得到满意结果，应及时考虑更换试剂盒。目前国内常用的血液核酸提取试剂有Qiagen、Biog等。根据我们的经验，Qiagen试剂盒的血液DNA提取得率，一般1ml样本在12-45ug左右，平均在30ug。Biog比Qiagen公司的血液DNA提取得率略高，1ml血液样本在15-48ug，平均在32ug，基本上都能满足下游PCR实验的要求。

二、血液核酸提取的纯度要高。一般通过测定OD260/OD280比值来估计核酸纯度。一般DNA 溶液OD260/OD280比值应在1.6--1.8之间，如果提取的DNA溶液OD260/OD280比值小于1.6，通常说明有蛋白质或酚、多糖等的污染。如果提取的DNA溶液OD260/OD280>1.9,则表明有RNA污染。不同品牌的试剂盒提取的DNA纯度略有差别，Biog的血液核酸提取纯度比Qiagen略低，可以直接应用于PCR、qPCR、病毒检测、分子杂交等。Qiagen的纯度略高，除了以上应用，还可用于对纯度要求略高的实验，如细胞转染等。但是一般来讲，目前的血液DNA提取主要应用于基因检测、PCR、qPCR、分子杂交等，国产试剂盒Biog都能满足要求。

三、产品价格。价格也是选购产品的重要考量因素。对于绝大多数实验如PCR、qPCR、基因检测、分子杂交等，国产试剂盒都能满足质量要求。与国外知名品牌相比，国产试剂盒的价格较为便宜，如Biog，价格还不到国外品牌价格的30%，性价比较高。因而，对于以上实验建议选用Biog等国产试剂盒。一些经费不是很多的课题研究或样本量较大的临床检测项目，特别适合选用国产试剂盒。有些研究对提取DNA的纯度要求相对较高，如细胞转染等，可考虑选用Qiagen等国外知名品牌。

     综合看来，与国外知名品牌相比，国产试剂盒在血液DNA提取纯度上略有不足，但不影响大多数实验，特别是下游需要PCR扩增的实验和分子杂交类实验。在提取得率上，国内试剂盒与国外品牌差别不大，而在价格方面，国产试剂盒具有比较明显的优势。如果经费充足，DNA纯度要求较高，可考虑选择Qiagen等国外知名品牌。如果经费不多或下游做PCR、qPCR、分子杂交等实验，可考虑选择性价比较高的Biog等国产品牌。