GST融合蛋白纯化解决方案

精彩看点

1.GST融合蛋白纯化纯化攻略

2.GST融合蛋白纯化解决方案

3.His标签蛋白&GST标签蛋白&FC融合蛋白&丝氨酸蛋白酶纯化技术汇总

GST融合蛋白

谷胱甘肽S转移酶（GST）是一个含有211个氨基酸的蛋白，通常将该蛋白加入到重组蛋白的末端以便对该重组蛋白进行纯化或检测。由于GST对于其底物-谷胱甘肽具有极高的特异性，所以可以获得更高的纯度。

另外，GST标签蛋白含有特殊的剪切序列，纯化后使用不同的蛋白酶即可简单的去掉GST标签。同时，GST标签蛋白的纯化在非常温和的条件下进行，可有效保护靶蛋白的功能和抗原性。

GST亲和填料的技术参数

基质	4FF（高度交联4%的琼脂糖）
粒径范围	45-165µm
平均粒径	90µm
结合载量	10-20mg(GST标签蛋白)/ml(介质)
pH稳定性	3-12
化学稳定性	所有常用水溶液，如： 1M醋酸盐，pH 4.0、 0.1M   NaOH、 70%乙醇、 8M尿素、6M 盐酸胍。
流速	200-300cm/h (0.3MPa，XK16/40，柱床高度为30cm)
操作压力	≤0.3MPa
贮存溶液	20%乙醇
贮存温度	4-30℃

GST融合蛋白表达

1)采用RT-PCR 扩增得到目的基因，构建到表达载体（PGEX-4T-1）上；
2)用构建质粒转化表达菌BL21，LB 平板37℃；
3)LB 平板上挑取单一菌落接入5mL LB 培养基（100ug/mL Amp）中，37℃培养3~5h；
4)将5mL 菌液接入1L LB（100ug/mL Amp）液体培养基中，37℃培养至OD₆₀₀≈0.6，加入0.3mmol/L 的IPTG，
5)20℃诱导16h；
6)将培养好的菌液于5000r/min 离心10min，弃去上清液，收集菌体，离心后菌体沉淀悬浮于25mL Binding buffer 中。

推荐缓冲液

●平衡液：0.14M NaCl、0.0027MKCl、0.01M Na₂HPO₄、0.0018M KH₂PO₄，调节pH 7.3，室温保存。

备注：平衡液配制完成后务必确保pH为7.3，当样本所在溶液的pH<6.5或pH>8.0时，样本与介质作用较弱甚至是无效的。

●洗脱液：0.05M Tris-HCl、0.01M GSH，调节pH 8.0，4℃保存。

备注：洗脱液要求现配现用；也可以先配制0.05M Tris-HCl，pH 8.0在4℃保存，使用前再加入GSH并调整pH为8.0（加入GSH后，pH会降低）。

●汇研生物GST-4FF亲和填料

（W：514099167，T:157 7197 3009)

应用案例

汇研生物GST-4FF填料纯E.coli 中表达的融合GST蛋白

GST-4FF

汇研生物——汇于智，精于研！

专注生物分离填料研制和生物工艺下游技术开发！