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金属蛋白酶(MMPs)是一种锌依赖的内肽酶，可裂解各种蛋白，调节正常和病变的细胞功能，因此，它们在人类组织发育、体内平衡以及癌症、子宫内膜异位症、关节炎等多种疾病的发病机制中发挥着重要作用。大多数MMPs是作为酶原潜伏酶产生的，必须被裂解才能激活其催化区域，而内源性蛋白抑制剂进一步调节活性。因此，它们在递归网络中发挥作用，降解细胞外基质蛋白，并通过分裂细胞表面和局部细胞周环境中的生长因子和受体来调节细胞信号。因此，关于特定活性基质金属蛋白酶浓度的高分辨率信息揭示其复杂的调控网络，可能会提高疾病的诊断和治疗。 本文作者介绍了一种新的并易于实现的在一个复杂体系中测量MMP活性的方法。他们将基于活性的酶标技术与商业化的高通量、多组分蛋白质定量技术相结合，得到了基于金属蛋白酶活性的多组分串联免疫分析法(MAMBI)。这个方法首先需要将样品与ABP探针孵育，ABP主要由两部分组成，生物素和特异性靶标MMP活性位点的warhead(基于MMP强性抑制剂设计）, 然后再利用改造过的商业化的MBAA beads来定量特异性活性MMPs的水平。在传统的免疫分析方法中，商业化的MBAA会同时捕捉活性和没有活性的靶点MMPs,然后用生物素标记的二级抗体和荧光亲和素孵育捕获beads,多色流式细胞术测量每个珠子的两个荧光信号:一个来自beads的信号表示是哪种靶点MMPs;荧光链霉亲和素信号，以表明结合的目标量。在MAMBI中，ABP结构上包含一个生物素基团，该生物素基团与荧光标记的链霉亲和素结合，产生与活性靶MMP数量成比例的荧光信号。当用MAMBI-处理的混合型beads时，beads固定的亲和素荧光强度与原溶液中给定MMP活性形式的水平相关。接下来作者就将这个方法做了一系列优化和验证，最后还应用到了一系列复杂的体系当中，证明这个方法的实用性和可靠性。 本文作者：ZX |
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