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测序金标准之旅丨收藏!基因分析仪十大常见问题

2019-09-25  stingray9...

实验组(4)

大神,Sanger 测序的工作流程有没有全套解决方案?

BigDye测序试剂盒,V1.1、V3.1、Direct,到底该选哪个?

喏,基因分析仪十大常见问题干货篇,赶紧收藏吧~

哇!太赞了!

01

毛细管电泳(CE)基因分析仪平台,你知道有哪些吗?

1987年,赛默飞Applied Biosystems在Sanger测序原理的基础上发布第一代真正商业化的自动测序仪。

1996年,推出310型全自动遗传分析仪,实现全部操作自动化,包括自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等。也标志着从平板胶进入毛细管电泳时代。

随后,伴随着仪器的更新,通量逐渐提高,出现我们常见的3130系列、3730系列以及经典的3500系列。其中3500Dx和3500xl Dx基因分析仪已获得NMPA认证。

站在巨人的肩膀上,2017年,推出最简便、自动化程度最高的一款基因分析仪,它就是SeqStudio

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02

基因分析仪的两大功能,您了解吗?

经过数十年结果的验证,Sanger测序是DNA测序的金标准,此外,多重片段分析也是您广泛应用的遗传分析技术。

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03

Sanger 测序的工作流程有哪些,您了解吗?

Sanger测序的工作流程从样本制备到最终数据分析,包括PCR扩增、PCR产物纯化、循环测序、测序反应纯化、毛细管电泳和数据分析如图,赛默飞提供Sanger测序全套解决方案

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04

BigDye测序试剂盒,V1.1、V3.1、Direct,您get 了吗?

测序试剂盒可以根据具体的实验需求进行选择,可参考如下的表格:

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* Recommended: ++

* Satisfactory: +

* Not recommended: -

05

Sanger测序流程中,循环测序反应时PCR产物的用量究竟要加多少?

不同长度的PCR片段对产物的需求量不一样,一般可参考如下列表:

06

POP-4、POP-6、POP-7胶,傻傻分不清楚?

POP4聚合物可实现快速反应,更适合于人类身份鉴定和片段分析。POP6聚合物是进行长片段测序的理想选择。当和BigDye V1.1一起使用时,POP-6也可以用于测定非常靠近5’端的碱基。POP-7聚合物介于POP-4和POP-6之间,他非常的灵活,适用于很多的应用。

07

片段分析,通过分离荧光标记的片段并检测其相对大小,荧光标记怎么设计?

一种是在引物5’端标记荧光基团,另一种是用荧光标记ddNTP。

5’端引物标记通常用于微卫星序列分析;荧光标记ddNTP通常用于SNaPshot多重分析。

08

片段分析数据信号强度的范围是多少?

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09

片段分析实验常用的荧光染料组合有哪些?分别包含哪些荧光染料?

片段分析实验常用的荧光染料组合为G5和E5。

G5染料组合包括6-FAM、VIC、NED、PET和LIZ,通常用于微卫星序列分析。

E5染料组合包括dR110、dR6G、dTAMRA、dROX和LIZ,主要用于SNaPshot 重分析。

10

基因分析仪上的数据,选择什么软件分析?

· 测序数据.ab1文件建议用Sequence Analysis软件进行分析;

· 片段分析数据.fsa文件建议用GeneMapper软件进行分析;

· 人类鉴定数据.hid文件建议用GeneMapper ID-X软件进行分析

写在后面:

如何联系赛默飞Applied Biosystems品牌产品的应用技术支持?

应用支持热线:800-820-8982-2-3(座机),400-820-8982-2-3(手机)。

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