分享

Illumina Hiseq/Miseq测序原理

2019-10-22  Mobio_Lab_Sun

一、Solexa测序技术前世今生(——Illumina平台)

Solexa高通量测序技术是由英国剑桥大学派生的Solexa公司建立起来的。该方法以单分子阵列技术为基础,是对合成测序技术的发展与延伸。

二、测 序 原 理

Solexa是一种基于边合成边测序技术(Sequencing-By-Synthesis,SBS)的新型测序技术。通过单分子阵列实现在小型芯片(FlowCell)上进行桥式PCR反应。通过可逆阻断技术实现每次只合成一个碱基,再利用相应的激光激发荧光集团,捕获激发光,从而读取碱基信息。

1)Flow Cell结构

2)可逆阻断技术


3)边合成边测序(SBS)


a.加入测序引物 

Cycles1 

    a)合成第一个碱基 

    b)清除未反应的碱基和试剂 

    c)激发荧光信号并读取 (可逆阻断技术步骤)

    d)去除荧光基团和阻断基团 (可逆阻断技术步骤)

Cycle2……Cycle n

4)桥式PCR(——簇生成之“起始延伸”)


5)桥 式 PCR(——簇生成之“扩增”) 


6)桥 式 PCR(——簇生成之“测序”

7)碱基读取



三、工作流程


四、测 序 类 型

a)单端测序(single-read sequencing,SR) 

b)双端测序(Paired-endsequencingPE 

c)混样测序(Indexsequencing

1)FollowCell 接头差异


Paired End

Uracil Specific Excision Reagent (USER)

尿嘧啶切割位点

FormamidopyrimidineGlycosylase (fpg)

糖基化酶切割位点


Single Read

Periodate Linearization

高碘酸盐切割位点

a)双 端 测 序

Paired-End sequencing(PE/双端测序) 

−检测基因片段两端的基因信息。


b)单 端 测 序

Single-read sequencing(SR,单端测序) 

−只检测基因片段一段的基因信息。


c)混 样 测 序

Index Sequencing:将多种样本混合测序 

−充分利用solexa高通量测序特点。


A:Adapter

B:Fragment DNA

C:Index seq primer

D:Index

E:Adapter


五、仪 器 构 造


六.测序结果展示

Fastq:Fastq是Solexa测序技术中一种反映测序序列的碱基质量的文件格式。

·Read 1

·Read 2

    转藏 全屏 打印 分享 献花(0

    0条评论

    发表

    请遵守用户 评论公约

    类似文章 更多