|
一、Solexa测序技术前世今生（——Illumina平台） Solexa高通量测序技术是由英国剑桥大学派生的Solexa公司建立起来的。该方法以单分子阵列技术为基础，是对合成测序技术的发展与延伸。 二、测 序 原 理 Solexa是一种基于边合成边测序技术（Sequencing-By-Synthesis，SBS）的新型测序技术。通过单分子阵列实现在小型芯片（FlowCell）上进行桥式PCR反应。通过可逆阻断技术实现每次只合成一个碱基，再利用相应的激光激发荧光集团，捕获激发光，从而读取碱基信息。 1）Flow Cell结构
2）可逆阻断技术  3）边合成边测序（SBS） a.加入测序引物 Cycles1 a)合成第一个碱基 b)清除未反应的碱基和试剂 c)激发荧光信号并读取 （可逆阻断技术步骤） d)去除荧光基团和阻断基团 （可逆阻断技术步骤） Cycle2……Cycle n 4）桥式PCR（——簇生成之“起始延伸”） 5）桥 式 PCR（——簇生成之“扩增”） 6）桥 式 PCR（——簇生成之“测序”）
7）碱基读取 三、工作流程
四、测 序 类 型 a)单端测序（single-read sequencing，SR） b)双端测序（Paired-endsequencing，PE） c)混样测序（Indexsequencing） 1）FollowCell 接头差异 Paired End Uracil Specific Excision Reagent (USER) 尿嘧啶切割位点 FormamidopyrimidineGlycosylase (fpg) 糖基化酶切割位点 Single Read Periodate Linearization 高碘酸盐切割位点 a）双 端 测 序 Paired-End sequencing（PE/双端测序） −检测基因片段两端的基因信息。 b）单 端 测 序 Single-read sequencing（SR，单端测序） −只检测基因片段一段的基因信息。 c）混 样 测 序 Index Sequencing：将多种样本混合测序 −充分利用solexa高通量测序特点。 A：Adapter B：Fragment DNA C：Index seq primer D：Index E：Adapter 五、仪 器 构 造
六．测序结果展示 Fastq：Fastq是Solexa测序技术中一种反映测序序列的碱基质量的文件格式。 ·Read 1 ·Read 2
|
|
|
来自： Mobio_Lab_Sun > 《微生物多样性》
