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美国首例患者体内的新冠病毒特征

2020-03-04  老夫不请...

    来源:小柯生命(科学网)

      公共卫生界需要病毒裂解物作为诊断参考,而研究界需要病毒分离物测试抗病毒化合物、开发新疫苗和进行基础研究。

      2020年3月4日,美国疾控中心等机构的研究人员在bioRxiv上发表论文,描述了从第一个美国新冠肺炎患者体内分离出的病毒,并描述了其基因组序列和复制特性(注意,预印本网站bioRxiv的论文未经同行评议)

      自新冠肺炎疫情暴发以来,美国第一例患者于1月20日被华盛顿州和美国疾控中心确诊。研究人员从该患者鼻咽(NP)和口咽(OP)标本中分离出病毒,并对病毒序列、复制特性和细胞培养向性进行了表征。

      他们于1月22日将阳性标本重新制作和冷冻,然后接种到细胞培养皿中。2天后,观察到细胞病变效应(CPE),3天后收集到病毒裂解液。50μl首次提取的病毒裂解物被用于新冠病毒核酸测试,能检测新冠病毒的离析。

      研究人员还检测了样本提取物中是否存在另外33种不同的呼吸道病毒或细菌病原体,检测结果——未发现其它病原体。

      此外,薄切片电子显微镜观察也支持生化培养检测鉴定的结果。研究人员还观察了冠状病毒的形态和形态发生特征。

 2.jpg

vero单分子层图像

      研究人员测序了从第一代OP和NP标本中分离出的病毒,二者的结果显示是完全匹配的。这是在没有胰蛋白酶的情况下所传代的病毒。并且,这是在缺乏胰蛋白酶的情况下,新冠病毒在VeroCCL81细胞和Vero E6细胞中复制到高滴度。早前已经分析,SARS-CoV和MERS-CoV也分别在VeroE6和VeroCCL81细胞上生长良好。

      研究人员在VeroE6细胞(另一种恒河猴胎儿肾脏细胞系)上产生了第四代新冠病毒。RNA测序显示,其与原始序列相比无核苷酸突变。

      经过一系列的稀释感染后,研究人员还发现新冠病毒在两种Vero细胞中都有复制,但VeroE6细胞的病毒滴度略高于Vero CCL81。

      此外,斑块在Vero E6上更加清晰可见(如图)。事实上早在接种后2天,VeroE6细胞就产生了明显的斑块,并可见中性红染色。相比之下,Vero CCL81产生的斑块较少。

3.jpg

      研究人员已将病毒分离物存入两个病毒试剂库。

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