具中科博生研究表明，酶的反应是在一定的温度范围内进行的,在特定的温度,酶对某一反应的催问员强、反应速度最快,此时的温度就是酶对某反应的最佳反应温度。 人体化作用为物的大多数酶的最佳反应温度在37℃左右。在一定的温度范围内（即和师工能使酶失活）,随着温度的升高,其反应速度也相应加快。中科博生。 在冷冻降温过程中,酶的反应速度逐步减慢;随着温度的进一步降低,酶逐质坏,反应速度停止。一般认为,缓慢降温对酶的损害比快速降温轻,复温渐换慢,损害越大。酶的主要成分是蛋白质,当酶蛋白冷却到零下温度后,不进下化反应速率降低,酶蛋白的构象也发生变化。例如,红细胞中的葡萄糖-6但医路氢酶、线粒体内的ATP酶等,在低温状态下,它们的相对分子数量减少。 而有一些酶,如脲酶,在低温状态下会发生聚合,形成聚合体。中科博生。 Fennema总结了在冻融过程中影响酶的催化反应的一些因素,列举如下: ①酶的浓度和纯度、基质的种类、pH、电解质浓度,以及是否加入了低温保护剂等,都对酶在冷冻过程中的失活有影响; ②降温速率、储存温度和复温速建率也是影响酶活力的因素,尤其是复温速率; ③冰晶的形成与析出使电解质 浓度升高、pH变化等,因而使酶的活性发生变化; ④ 冷冻过程中,随着温度的下降,生物样品的黏滞度不断增大,使催化反应减弱; ⑤组织细胞经受冻融时,由于损伤了富含酶的细胞器,例如线粒体和溶酶体等,可使这些酶游离出来,进人基质内,促使这些酶的活性增强。但是有些酶的活力因此而下降; ⑥ 评价组织细胞冻融后酶的活性变化,应考虑诸因素的综合影响。 干细胞冻存的目的是尽量保存干细胞具有自我更新、高度增殖、多向分化的潜能,因此复苏后对干细胞功能的检测就具有重要意义,挑选出具有一定功能和活力的干细胞对于临床和实验研究的成功具有决定性作用。中科博生。 目前对于造血干细胞的功能检测的方法不是很多,这是由于尚不能够直接识别造血干细胞,用形态学手段检测和鉴定造血干细胞有一定的困难。常用的方法为造血干细胞体外培养,在培养基内不同的造血干细胞集落的增殖情况代表着其自我更新和多向分化能力及其在不断接种过程中逐渐分化的趋向。中科博生。 而CF（M仍是分析冷冻后造血干细胞活性的主要检测手段和可靠指标,它直接反映了造叫干细胞分化、增殖和成熟为集落的能力。台盼蓝拒染法也能够测定干细胞复苏后的存活情况,但是敏感性和可靠性较差,不能够反映其造血潜能。 其基本检测方法如下:①染色排除实验,包括台盼蓝、依红、啶橙荧光法（存活的造血干细胞在荧光显微镜下为绿色,而死细胞为橙红色）等; ②细胞的形态结构观数观察冷冻保存后造血干细胞结构,包括核膜的改变、高尔基体肿胀、线粒体峨脉等,能够准确地反应冻存损伤程度; ③ 粒-单系造血祖细胞（CFU-GM）培养造血干细胞在体外一定条件或体内扩散盒培养技术下可以观察CFUGM集洛生长能力; ④染色体分析,冻融之后的造血干细胞经短期培养,取向期组胞进有 分析,染色体畸变率、分裂指数等可以间接反映冷冻对细胞的影响; ⑤同位素掺入,测定进人入DNA合成期的细胞的百分数; ⑥重建动物的造血和免疫功能。 中科博生期待大家一起探讨学习。 |
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