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新型Trinder’s试剂与传统显色试剂的比较

 湖北新德晟 2020-05-07

目前新型Trinder's试剂主要有TOOS、TOPS、ADOS、ADPS、ALPS、DAOS、HDAOS、MADB,MAOS等。这些新型色原其实和传统色原的反应原理是类似的,但是具有更多优势。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,新型Trinder’s 试剂在与 4-氨基安替比林(4-AA)或 3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH)的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高 1.5-2 倍。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此,可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。新型Trinder's试剂具有高水溶性 ,是一种稳定的苯胺类似物 ,生色过程和氧化反应的pH范围很广 。

传统Trinder’s试剂主要有酚类(如苯酚,4-氯苯酚,2,4二氯-6-苯酚磺酸钠等)和苯胺类(N,N-二烷基苯胺,N,N-二烷基-间甲苯胺等)。

显色底物

1、酚类Trinder’s试剂形成的颜色反应的产物,最大吸收波长在500~520nm,而血清中胆红素的吸收波长在380~530nm,会对检测结果造成干扰,需另外加入高铁氰化钾来排除干扰。苯酚在使用前都要溶解、蒸馏、重结晶处理,给使用者增加了很多麻烦。

2、传统苯胺类Trinder’s试剂形成的颜色反应的产物,最大吸收波长在550~555nm,但该类颜色反应只能在酸性条件进行,有许多酶在酸性条件下会失活,大大限制了应用的广度。另外苯胺在水中的溶解度不大,需加入乙醇促进溶解,其显色反应需大于20min才能发色完全。

为什么用酶,因为血清中含有太多物质,而酶有专一性,比如加葡萄糖氧化酶,只会催化氧化血糖生成过氧化氢,而不会催化氧化血清中同时存在的尿酸等,这样就确保了检测的准确性,如果其它成分生成过氧化氢就会和血糖生成的过氧化氢混合而无法准确测量血糖含量。由于用到酶,而pH值对酶的活性影响很大。每一种酶都有各自的高活性PH值区间。比如过氧化物酶最适pH值7.0左右,萄糖氧化酶最适pH值为3.5 – 6.5,尿酸氧化酶最适合pH8.5左右等。因此用不同的Good’s缓冲剂提供不同的酶所需要的各自适合的缓冲区间。

因此只能在酸性条件进行的传统苯胺类色原底物无法满足一些酶的最适pH只环境,在此基础上,对苯胺类色原底物进行官能团的修饰,德晟科技着重研发了一批新型的Trinder’s试剂等显色试剂。新型试剂有更多优势:比如高水溶性,显色反应产物紫外吸收>540nm;显色反应对PH范围要求较宽,反应中能保证多种酶的活性;显色反应灵敏度较高,能用于极微量待测物的测定。

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