福建福州三月质检
将PVY病毒外壳蛋白基因(PVYP)导马铃薯，并使之表达即可获得抗PVY病毒马铃薯。图示是获得抗病毒马铃薯的部分操作，PVYP可以从质粒A中获取；质粒B是选用的运载体，另已知部分限制酶识别序列和切割位点：
CCC↓GGG
GGG↑CCC
请结合图像，运用所学知识回答问题：
(1)含有PVYP的质粒A保存在某细菌群体中，各个细菌含有相关不同的基因，这样的细菌群体称为。
(2)关于步骤②中Ⅺenow酶的猜测，合理的是。
A．催化合成的片段起引物作用
B．可以将DNA片段的粘性末端变成平末端
C．能催化DNA链的合成
D．与DNA连接酶的功能相同
(3)步骤④中应该使用的限制酶是。
(4)利用农杆菌转化法进行转化，首先需要将质粒导入中，进而转化马铃薯薯片，然后通过技术获得抗PVY病毒马铃薯苗，最后进行相关的鉴定。1）基因文库（部分基因组文库、基因组文库给分）。
（2）BC
（3）BglⅡ、SmaⅠ(仅答出一种酶给1分)
（4）农杆菌植物组织培养
湖北襄阳五中
目的基因主要是指的基因，也可以是一些具有的因子。（2）是基因工程的核心，cDNA文库属于基因文库，（3）PCR是一项利用原理在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术，其需要的酶是。（4）从分子水平检测目的基因是否翻译可以用方法，若有出现，表明目的基因已形成蛋白质产品。
（1）编码蛋白质调控作用
（2）基因表达载体的构建部分
（3）DNA（双链）复制热稳定DNA聚合酶（Taq酶）（1分）
（4）抗原-抗体杂交杂交带
mRNA__________，从而阻断了（）诱变（）农杆菌转化法Ti质粒T-DNA（）
（）结合形成双链RNA
图一图二
在图一中_____（A/B）插入终止子。构建重组质粒BPT必须使用__________作为工具酶。
从大肠杆菌中提取融合蛋白P-BPT仍需进一步修饰、纯化。其主要原因是因为大肠杆菌不具备__________（细胞器）。
实验中抽取小鼠脾的淋巴细胞进行细胞培养，在培养基中需要添加_______防止杂菌生长。（1）常用的获取目的基因的方法有从基因文库中获取和 ；从基因文库中提取的目的基因通过PCR进行扩增时，需使用一种特殊的酶是 。
（2）构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中 ，且能够表达和发挥作用。它的组成中的启动子、终止子的化学实质为 。
（3）将表达载体导人动物的受精卵中，一般采用 技术。在抗虫农作物的培育过程中，将Bt毒蛋白基因导入农作物受体细胞时，常用的方法是 。将目的基因导入大肠杆菌时，需用Ca2+处理，使其成为一种 细胞。
（4）检测细菌的目的基因是否转录出mRNA时，需要 作探针，再与相应的物质杂交。
（1）人工合成（1分） 热稳定的DNA聚合酶（或Taq酶）（2分）
（2）稳定存在并遗传给下一代（2分） 一段（有特殊结构的）DNA片段（2分）
（3）显微注射（2分） 农杆菌转化法（2分） 感受态（2分）
（4）标记的目的基因（2分）
河北保定定兴三中
转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中Pst、Sma、EcoR、Apa等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下图表示四种限制酶的识别序列及酶切位点。
(1)若要获得抗病基因，能否用限制酶Sma对图中对应的位点进行切割？________，说明理由_________。要获得含抗病基因的重组质粒能否用Pst、Apa限制酶切割质粒？________。
(2)卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有________基因，作为标记基因。
(3)、阶段是否可使用同种培养基？________；理由是______。
(4)阶段是否可使用不添加植物激素的培养基？________；理由是_______。
(1)不能对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构不能(2)抗卡那霉素(3)不能2个阶段培养基中生长素与细胞分裂素的比值不同(4)可以因为芽能产生生长素促进根的生长
下图表示利用基因工程培育抗虫棉的过程，请据图回答下列有关问题：
(1)若限制酶的识别序列和切点是—↓GATC—，限制酶的识别序列和切点是—G↓GATCC—，那么在过程中，应用限制酶________切割质粒，用限制酶________切割抗虫基因。过程在________(体内/体外)进行。
(2)将通过过程得到的大肠杆菌涂布在含有________的培养基上，能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入，该培养基从功能方面属于________培养基。
(3)重组质粒导入大肠杆菌的目的是________。
(4)过程所用技术称为________，从遗传学角度来看，根本原因是根细胞具有________。
(1)ⅡⅠ(Ⅰ和Ⅱ)体外(2)四环素选择(3)大量复制目的基因(抗虫基因)(4)植物组织培养发育成完整个体所需的全套遗传物质
(1)人工合成降钙素DNA的过程中，需要用Klenow酶来补平双DNA中缺失的脱氧核苷酸，从功能上看，Klenow酶是一种________________酶。
(2)图中该DNA与细菌的质粒相结合要依靠___________酶，其作用部位是_________，然后将重组质粒移植到酵母菌体内，酵母菌在基因工程中称为____________。
(3)一个基因表达载体的组成，除了有目的基因外，还应在首端有驱动基因转录的____________。为方便筛选，其上还应具有某些____________________。
(4)将目的基因导入微生物细胞时，常常用_______处理细胞，使其形成_________细胞，以便易于吸收环境中的DNA分子。
吉林期末
转基因草莓中有能表达乙肝病毒表面抗原的基因，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，其培育过程如图所示（①至④代表过程，A至C代表结构或细胞）：
（1）这种新型疫苗，在免疫学中属于，图中可看出该疫苗的化学本质是。图中①过程用到的酶是DNA连接酶，所形成的B叫做。
（2）②过程常用处理农杆菌，使之成为细胞，利于完成转化过程。
（3）图中③过程叫做脱分化，④过程叫做，将叶盘培养成草莓幼苗的技术的原理是。
（4）②过程采用最多的是农杆菌，在分子水平上，可采用的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原。
（5）乙肝病毒表面抗原基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。
⑴抗原蛋白质基因表达载体（重组质粒重组DNA）(各1分)
⑵CaCl2溶液（或Ca2+）感受态
⑶再分化(错字不给分)细胞的全能性
⑷抗原—抗体杂交（5）转化
（1）花卉基因工程可细分为花色基因工程、花形基因工程、香味基因工程等，不同的基因工程所需要获取的（1分）不同。
（2）基因工程中最常用的运载体是，另外还有、动植物病毒等。整合了目的基因的重组质粒，在组成上还含有启动子、终止子和。
（3）②过程常用的方法是，检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，需要
采用技术。
（4）外植体一般从受体植物的形成层处获取，原因是这部分细胞。由外植体培养为转基因植株的③、④过程分别为，该过程的理论基础是。
（5）人工种子就是以形成b之后得到的、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。
（1）目的基因（2）质粒λ噬菌体的衍生物标记基因（3）农杆菌转化法DNA分子杂交技术（4）分生能力强（易诱导形成愈伤组织）脱分化和再分化植物细胞的全能性（5）胚状体图示为应用生物工程获得人们需要的生物新品种或新产品的方案。请回答下列问题：
（1）方案中，通常利用Ti质粒将抗虫基因导入棉花受体细胞，为了使抗虫基因顺利连接到受体染色体基因组中，抗虫基因通常位于Ti质粒的片段中。。
推测方案中prG基因最可能的作用是。
方案中的转抗血栓基因山羊可以通过分泌乳汁来生产抗血栓药物。在构建的相应基因表达载体中，抗血栓基因的首端必须含有使其仅能在山羊细胞中特异性表达的，人们通常将此类转基因动物称为。
方案中的早期胚胎在移植入受体母子宫之前必须对胚胎进行性别鉴定，一般是取处于时期的细胞进行检测。
-抗体杂交法
（2）调控细胞（无限）增殖
（3）乳腺启动子乳腺生物反应器
（4）囊胚滋养层（1分）
广东十二校
南方的水果香蕉味香、富于营养，终年可收获引种，生长引种，
①形成重组质粒A时，应选用限制酶_________，对含抗病基因的DNA和质粒进行切割。
②图中①②表示组织培养过程中香蕉组织细胞的_________过程。该技术表明，当植物细胞、组织处于_________状态时，在一定的外界条件的作用下，可表现出全能性，发育成完整植株。
湖南岳阳二检
科学家将人的胰岛素基因与质粒重组后，导入牛的受精卵，并成功从牛奶中提取到了人胰岛素。回答下列相关问题：
(1)获取目的基因的主要途径包括直接提取和_________________________。
(2)在构建基因表达载体的过程中，目的基因和质粒用同一种__________________进行切割。
(3)在将基因表达载体导入牛的受精卵的过程中，常采用______________________法，若将基因表达载体导入大肠杆菌细胞中，则通常采用______________________溶液处理大肠杆菌，使其成为______________________细胞。
(4)为了得到较多的卵细胞，可以对受体母牛注射适宜剂量的___________________；利用获能的精子进行体外受精，经过细胞培养至______________________期进行胚胎移植，最终获得“符合要求的个体”，这个“符合要求的个体”具体是指________________
______________________________。
(1)人工合成（1分）(2)限制酶(3)显微注射CaCl2感受态
(4)促性腺激素桑椹胚或囊胚能分泌含人胰岛素牛奶的母牛
⑴①中用PCR技术扩增目的基因，该过程中所用的模板是；在获得大量目的基因后，需要使用酶将其重组到病毒DNA上。
⑵被重组病毒感染后的蚕细胞需经过②，以达到增加疫苗产量的目的。在此过程中需要通过控制通入量，以维持培养液的pH。
⑶为检测样液中是否含有有效成分，在③中使用进行检测。
⑴含有MEV－VP2蛋白基因的DNA片段限制酶和DNA连接⑵动物细胞培养CO2⑶MEV－VP2蛋白的抗体
福建龙岩高三质检
烟草在受到烟草花叶病毒的侵染后．产量会大大降低，我国科学家利用基因工程技术成功培育出抗烟草花叶病毒的烟草。下图是转基因烟草培育过程示意图。
(1)PCR扩增的前提是要有一段已知_____________的核苷酸序列。以便合成引物I、Ⅱ。
(2)构建基因表达载体时，需将抗烟草花叶病毒基因插入到Ti质粒的_____________上，然后通过农杆菌的转化作用。将其插入到烟草细胞的_____________上，使抗烟草花叶病毒的性状能得以稳定维持和表达。
(3)图中过程②依据的原理是_____________,②过程中细胞增殖的主要方式是_____________。
（1）抗烟草花叶病毒基因（写目的基因给1分）
（2）T-DNA染色体DNA
（3）植物细胞的全能性有丝分裂
安徽合肥质量检测
下面是获取某种二倍体抗虫植株的技术流程图：
请完成下列问题：
（1）上图中二倍体植物愈伤组织是外植体在适宜的__________________________及温度、PH等条件下培养形成的，这一过程被称为________________________。
（2）在获取抗虫植物的技术流程中，_________________、__________________和工具酶等物质均来自微生物。
（3）下图中A、B、C、D四段DNA单链是根据毒蛋白基因对应片段合成的。假定在该DNA复制中，以a链为模板，子链由左向右延伸。
则在流程图的过程①中应选择_____________________（填字母）作为引物。如果选取的引物，使过程①的效率很低，则所选的引物中可能存在___________________________________和______________________________________________________________。
（4）如果要获取检测毒蛋白的单克隆抗体，通常要在动物细胞工程中___________________和________________________等技术的支持。
（1）营养和激素；脱分化
（2）抗虫（或目的）基因；运载体（3）AD；两种引物可以发生互补配对；两种或其中一种引物可以发生自身配对（4）细胞融合；细胞培养
海南高考压轴卷
已知SARS是由一种RNA病毒感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康复后的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。某研究小组为了研制预防SARS病毒的疫苗，开展了前期研究工作。其简要的操作流程如下：
（1）实验步骤①所代表的反应过程是。
（2）步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用限制性内切酶和酶，后者的作用是将限制性内切酶切割的和连接起来。
（3）如果省略步骤②而将大量扩增的S基因直接导入大肠杆菌，一般情况下，不能得到表达的S蛋白，其原因是S基因在大肠杆菌中不能，也不能。
（4）为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性，可用
与进行抗原——抗体特异性反应实验，从而得出结论。
（5）步骤④和⑥的结果相比，原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列（相同、不同），根本原因是。
（1）逆转录（2）DNA连接 载体S基因
（3）复制 合成S基因的mRNA（4）大肠杆菌中表达的S蛋白 SARS康复病人血清（5）相同 表达蛋白质所用的基因相同
（1）为了获得?-蛋白的基因，在已知?-蛋白的氨基酸序列的基础上，推测出?-蛋白的序列，据此可利用方法合成目的基因。获得?-蛋白的基因还可用、方法。高考资源网
（2）如下图，若用限制酶E和F从原核生物基因组DNA上切下?-蛋白的基因，并将之取代质粒Z1上相应的E—F区域(0.4kb，1kb=1000对碱基)。（图中E、F、G、H是4种识别序列完全不同的限制酶及其部分识别位点）
①此时所形成的重组质粒Z2的大小为5.4kb，问目的基因的大小是_________；
②若用限制酶E和F处理Z2，则会出现Z2____________；
A．既能被E也能被F切开B．能被E但不能被F切开
C．既不能被E也不能被F切开D．能被F但不能被E切开
③若用限制酶G切割Z1，可得到一种2.5kb的DNA片段；若用限制酶G切割Z2，可得到2.5kb、1.4kb和0.1kb三种片段，问Z2上有个限制酶G识别位点。
（3）若用含有重组质粒的土壤农杆菌直接感染玉米植株的根部伤口，则该植株的种子中（填“含有”或“不含”）?-蛋白基因。
34.（1）基因（DNA碱基）化学基因文库PCR
（2）①0.8kb②A③4（3）不含
黑龙江大庆实验中学
我国部分地区出现了H7N9禽流感疫情，H7N9为一种RNA病毒，请据图回答有关问题：（1）要获得单个受体细胞，需用处理动物组织．在受体细胞的培养过程中，为了防止污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的。
（2）图中①过程的核心步骤是，要检测导人的基因在受体细胞中是否成功表达，可采用方法。
（3）图中X细胞表示，②表示过程。
（4）若要获得更耐储存的抗体，可以利用工程技术对其进行改造，此技术是在的基础上延伸出来的。
（1）胰蛋白酶?（1分）?抗生素（2）基因表达载体的构建???抗原-抗体杂交（3）骨髓瘤细胞???细胞融合（4）蛋白质??基因工程
湖北三校
下图为利用生物技术获得生物新品种的过程。据图回答：
（1）A→B必需的工具酶有。
（2）在基因工程中，B表示。
（3）B→C为转基因绵羊的培育过程，其中④用到生物技术主要有。
（4）若使用棉花的体细胞为受体细胞，⑤表示的生物技术是。请简述利用棉花受体细胞培育成转基因抗虫棉幼苗的过程：。
（5）要确定目的基因（抗虫基因）是否导入受体细胞，检测的方法是。
目的基因（抗虫基因）是否能稳定遗传并表达，在个体水平上通过进行检测和鉴定。
转基因工程改良动植物的品种，最突出的优点是。
（当代中学生报2014模拟）
运用现代生物技术的育种方法，将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中，培育出转基因抗虫的油菜品种。这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白，对菜青虫有显著抗性，能大大减轻菜青虫对油菜的危害，提高油菜产量，减少农药使用，保护农业生态环境。
（1）Bt毒蛋白基因插入Ti质粒后，不能影响Ti质粒的。
（2）将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，题中所用的是 。
（3）转基因抗虫油菜的培育是否成功，最简便的检测方法是。
（4）已知转基因油菜中杀虫蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该杀虫蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞表面。
（5）转基因油菜获得的是由Bt毒蛋白基因的表达产物来体现的，苏云金芽孢杆菌中的Bt毒蛋白基因和油菜细胞中的Bt毒蛋白基因所控制合成的Bt毒蛋白在功能和序列上是相同的。
（1）复制（2）农杆菌转化法（3）用油菜叶饲喂害虫（4）无相应的特异性受体（5）抗虫性状；氨基酸
安徽淮南二模
玉米中赖氨酸的含量较低，原因是赖氨酸合成过程中，天冬氨酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶的活性受细胞内赖氨酸浓度的影响。为此，有人通过基因修饰或合成，获得赖氨酸高产的玉米。请回答：
（1）将改造后的基因在体外大量扩增，常用的方法是___________.在基因改造后，构建基因表达载体时需要用到的2种工具酶是_________、__________.
(2)将改造后的基因导入玉米时，常用_______________法，它与常见的双子叶植物的导入方法不同。一般情况下，导入目的基因后，是否可以稳定表达其遗传特性，还需要进行检测与鉴定，检测对象是______________,有时还要进行个体生物学水平的鉴定。
（3）进行上述基因改造后的玉米体细胞，再通过_______________技术得到高产赖氨酸的玉米植株。
（1）PCR技术限制性核酸内切酶DNA连接酶
（2）基因枪法目的基因表达出的蛋白质
（3）植物组织培养
（当代中学生报2014模拟）
某研究所成功培育出携带人白蛋白基因的转基因可大大提高基因表达水平使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高了30多倍
（1）将人白蛋白基因
（2）人白蛋白基因转录时在酶的作用下成mRNA
（3）所谓提高基因表达水平是指设法使牛的乳腺细胞中白蛋白基因
人们只能在乳汁中获取到人白蛋白
（4）如果人白蛋白基因的序列是已知的可以用方法合成该目的基因
（1）显微注射技术（2）RNA聚合；核糖体
更多地进行转录、翻译，产生更多的人白蛋白；人白蛋白基因只在乳腺细胞中表达
（4）化学
下图表示应用现代生物技术制备甲型H1N5病毒抗体的设想，请回答下列问题： （1）在培育甲型H1N5病毒抗体转基因奶牛的过程中，①过程属于基因工程中_________的构建，这要求甲型H1N5病毒抗体基因的首端必须含有_______的启动子。（2）③过程需将受精卵培养到___________时期再植入母体。暂不移入的胚胎可使用__________方法保存，牛胚胎干细胞（ES）可由这些早期胚胎中分离培养获得，在滋养层细胞上培养能维持_________的状态，对ES细胞进行定向________后可用于器官移植。（3）冷冻（或低温）诱导分化（3）B细胞或已免疫的B細胞）无限增殖（4）纤维素酶和果胶酶PEG（聚乙二醇）
河南十所名校
科学家利用植物体细胞杂交技术成功获得了番茄一马铃薯杂种植株，为了便于杂种细胞的筛选和鉴定，科学家利用红色荧光和绿色荧光分别标记番茄和马铃薯的原生质体膜上的蛋白质，其培育过程如图所示：
(1)植物体细胞杂交依据的生物学原理有____________________________________。
(2)过程①常用的酶是_____________，细胞融合完成的标志是________________________。
(3)植物原生质体融合过程常利用化学试剂______________诱导融合，在鉴定杂种原生质体时可用显微镜观察，根据细胞膜表面的荧光的不同可观察到______________种不同的原生质体，当观察到____________时可判断该原生质体是由番茄和马铃薯融合而成的。
(4)过程③和过程④依次为______________，过程④中的培养基常添加的植物激素是____________。
(5)若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞中含n条染色体，则“番茄一马铃薯”细胞在有丝分裂后期含__________条染色体。若杂种细胞培育成的“番茄—马铃薯”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于_____________植株。
黑龙江哈三中一模
下图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。请据图回答下列问题：
（1）生产单克隆抗体的基础技术是______________________________。制备单克隆抗体依据的基本原理是________________________________________。
（2）利用小鼠制备甲型H1N1流感病毒单克隆抗体的过程中，需先给小鼠注射一种纯化的H1N1流感病毒核衣壳蛋白，再从已免疫的小鼠脾脏中获得____________________。在②过程中，常采用____________________诱导融合。再经过筛选最终可获得④，该细胞群的特点是______________________________。?
（3）若要大量制备单克隆抗体，可将④细胞注射到小鼠的腹腔中使其增殖，再从_______
__________中提取、纯化获得单克隆抗体。也可将④细胞置于培养液中进行体外培养，在培养液中通常需加入__________等天然成分。
（4）通过上述方法得到的单克隆抗体的优点是______________________________。?
（2）B淋巴细胞（2分）灭活的病毒（2分）既能无限增殖又能产生专一抗体（2分）
（3）腹水（2分）动物血清（2分）
（4）特异性强，灵敏度高，可大量制备（2分）
湖北宜昌五月模拟
资料甲20世纪六十年代一些科学家尝试将番茄和马铃薯杂交试图培育出一种地上长番茄地下结马铃薯的
资料乙经过长期的实验科学家们采用体细胞杂交的方法终于得到了
资料
（1）资料甲中，科学家们始终未成功的原因是番茄和马铃薯之间存在着。
（2）资料乙中，在进行体细胞杂交之前，必须先利用和去除细胞壁，获得具有活力的，再诱导其融合。
（3）对资料丙中的植株进行植物组织培养，能否获得大量“番茄—马铃薯”植株？；对三倍体西瓜进行植物组织培养，能否获得大量三倍体西瓜苗？。
（4）动物细胞也能进行融合，常用的诱导融合因素有PEG、电激和。动物细胞融合最重要的应用是利用融合得到的制备单克隆抗体。长期以来人们获得抗体的方法是向动物体内反复注射某种抗原，从动物中分离出抗体。这种方法不仅产量低、纯度低，而且制备的抗体。单克隆抗体可用来制成“生物导弹”杀灭癌细胞，“生物导弹”中单克隆抗体的作用是。
（1）
（2）
（3）
（4）如图是某单基因遗传病的家系图。
（1）为研究其发病机理，通常采用获得大量致病基因，该技术成功的关键是要有酶。
（2）为诊断2号个体是否携带致病基因，通常采用的分子生物学检测方法是。
（3）该病会导致病人免疫能力下降，被病毒感染后的治疗需要大量的抗体。临床使用的小鼠免疫后制备的鼠源性单抗但存在一些弊端，其中之一是会引起人体抗鼠源抗体反应。5号个体在连续隔周注射某种鼠源性单抗治疗一种病毒感染性疾病，开始病毒量明显减少，一段时间后，这种病毒量又开始上升，排除病毒变异的因素，上升原因还可能是人体产生了，使鼠源抗体不能发挥抗病毒的作用。
（4）目前，研究人员可应用技术，改造鼠源性抗体分子的结构，降低鼠源性抗体的人体反应。
继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：
（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是。
（2）进行基因转移时，通常要将外源基因转入中，原因是。
（3）通常采用技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。
（4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的细胞中特异表达。
（5）为使外源基因在后代长期保持，可将转基因小鼠体细胞的转入细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体。该技术称为。
（分）
黑龙江哈三中三模
普通番茄属双子叶茄科植物，其细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家们通过基因工程技术，培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种，操作流程如图。请据图回答：
（1）在番茄新品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞最常用的方法是，筛选出含重组DNA的土壤农杆菌时通常依据质粒上的的表达。
（2）为促使图中②、③过程的顺利完成，需要向培养基中加入的植物激素主要有
和，并需要在条件下进行。
（3）要短时间得到更多的转基因抗软化番茄植株，目前常用的技术方法是。要想获得这种番茄的脱毒苗，应用其进行培养。
（3）除了图示培育方法外，还可通过蛋白质工程技术，对进行定向改造，从而获得抗软化的番茄品种。
（4）为防止转基因番茄通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其它植物而造成基因污染，可将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄植物细胞的（结构）中。
（1）农杆菌转化法（1分）,标记基因（2分）
（2）生长素（1分），细胞分裂素（1分）（不分先后）无菌和人工控制（2分）
（3）植物组织培养(微型繁殖)（2分）,茎尖（2分）
（4）多聚半乳糖醛酸酶基因（2分）
（5）线粒体或叶绿体（2分）
河南开封
肝脏是机体物质代谢的主要场所，请同答：
(1)肝脏对大部分激素具有灭活和降解作用，此作用有助于机体维持________，从而保证机体正常生命活动。
(2)慢性肝病患者的肝细胞膜上的胰岛素受体数目减少，导致患者血糖浓度升高，其主要原因是________。血糖浓度升高使机体的细胞外液渗透压升高，从而使垂体释放的________增多。
(3)肝脏内多种免疫细胞受神经支配，神经末梢释放的________能调节这些细胞的免疫效应。
(4)下图表示利用细胞工程技术治疗肝病患者的流程图。问：
①甲细胞应是取白________（患者父母／患者／患者的兄弟姐妹）的正常体细胞，去核卵母细胞来白于________期卵母细胞；早期胚胎细胞的分裂方式是________。
②胚胎干细胞是从早期胚胎中________部位的细胞发育来的一类细胞，胚胎干细胞可以分化为成年个体的任何一种组织细胞，从功能上说是因为胚胎干细胞________，其根本原因是________。
③图中a、b所涉及的生物工程技术分别是________________________________.
湖北武汉四月调研
在ABO血型系统中，A型血和B型血人红细胞膜表面分别含有凝集原A、B,AB型血人红细胞膜表面同时含有凝集原A和B,O型血人红细胞膜表面没有凝集原。下图是利用动物细胞杂交方法制备人抗A凝集原抗体的过程，请回答下列问题:
(1)要制备人抗A凝集原抗体,应向小鼠体内注射细胞，使小鼠产生免疫。从小鼠体内分离的细胞①为细胞。
(2)为诱导细胞①与骨髓瘤细胞融合，常选用作为诱导剂。融合后的培养液中存在多种杂交细胞和未融合细胞，需要进行培养、克隆化培养和，才能获得需要的杂交瘤细胞。
(3)杂交瘤细胞继承了双亲细胞的遗传物质，因而既能在体外培养条件下，又能产生。
(4)制备的人抗A凝集原抗体能与发生特异性结合，若用该抗体与待测血液样本呈阳性反应，则待测样本的血型是。
（当代中学生报2014模拟）
药用植物是一类具有特殊用途的经济植物，对人类健康具有重要的医疗和保健作用。药用植物的品种改良工作引起了科研人员的重视。请回答下列问题：
(1)科研人员用花粉培养出单倍体植株，此实验的原理是利用了________。为鉴定单倍体植株，可制作________进行染色体观察。
(2)川芎易受病毒侵染造成大幅度减产，日本学者用川芎的________作为外植体进行脱毒培养，在适宜浓度的________诱导下，外植体经________和________形成脱毒川芎。
(3)科研人员试图通过________技术将中药柴胡的药效成分基因转入胡萝卜。他们将柴胡的原生质体与胡萝卜原生质体进行融合，通过组织培养最终获得了再生愈伤组织。
(4)莨菪中分离得到的天仙子胺6β羧化酶基因转入颠茄中，转基因植株能够产生大量的东莨菪碱。这项技术的应用在一定程度上打破了种间的________。若从分子水平上检测天仙子胺6β羧化酶基因是否成功在颠茄细胞中转录，可采用________技术，用放射性同位素标记的基因探针与________进行杂交。
(1)(生殖)细胞的全能性临时装片(2)茎尖(或芽尖)生长素和细胞分裂素(或植物激素)脱分化再分化(3)体细胞杂交(4)生殖隔离(或杂交不亲和性)核酸分子(或核酸)杂交mRNA
（当代中学生报2014模拟）
玉米是雌雄同株异花的单子叶植物，是生产和科研的好材料。现有两个玉米品种，其基因型分别为yyRr和YYrr。科学家分别将它们的花粉除去细胞壁，然后诱导其融合，再把这些融合细胞进行培养，培育出了玉米新品种。
(1)上述育种方法采用了_______技术，其生物学原理是___
(2)这两个品种的去壁花粉可用等物理手段诱导融合，共可产生种基因型的融合细胞(仅考虑两两融合)，这些融合细胞经过脱分化形成，再经培养可以得到种不同于亲本表现型的玉米新品种，这些新品种的叶肉细胞内有个染色体组。
(3)若想培育出基因型为yyRR的玉米植株，也可直接用yyRr品种植株的花粉培养，再经过
并筛选获得，这种方法叫做，与传统有性杂交方法相比，它的优点是。
(1)植物细胞工程(或植物体细胞杂交)；生物膜的流动性和植物细胞的全能性(2)离心、振动、电激；6；愈伤组织2；2(3)染色体加倍；单倍体育种；大大缩短了育种年限，节约了人力物力
河南郑州三模
科学家从某无限增殖的细胞中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答下列问题。
（1）利用_________技术制备单克隆抗体，常用聚乙二醇、__________、电激等诱导因素诱导细胞融合。再经多次筛选和细胞培养获得足够数量的能分泌所需抗体的________细胞。
（2）有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，请完成设计方案：
①取_________细胞的细胞核，移植到去核的能够__________的细胞中，构成重组细胞。
（假定移植后细胞核中基因的表达状态不受影响）
②将重组细胞在___________条件下做大规模培养或注射到小鼠_________内增殖，以获得大量单克隆抗体。
（3）也有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因（prG）来制备单克隆抗体，其思路如下图所示。
①酶A是指______________，酶B是指________________。
②图中Ⅰ表示____________，对Ⅱ进行检测与鉴定的目的是_____________，Ⅲ所指的细胞具有的特点是_________________。
（1）动物细胞融合灭活的病毒杂交瘤细胞
（2）特定抗原刺激的B淋巴（2分）无限增殖体外腹腔
（3）限制性核酸内切酶DNA连接酶目的基因（无限增殖调控基因或prG）
检测目的基因是否导入和是否表达（2分）既能无限增殖，又能产生特定抗体（2分
（1）酶X是_________酶，其主要作用是_________________。
（2）物质Y是______________，乙组起______________作用。
（3）细胞体外培养所需营养物质与体内基本相同，例如，需要有________、________、促生长因子、无机盐、微量元素等，通常还需要加入血清、血浆。
（4）为清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，应采取的措施是__________________。
（5）实验结果：若甲组，说明紫杉醇有抗肿瘤作用。
（6）为了解决紫杉醇的药源问题，理论上可用技术把离体的红豆杉细胞经过_____________培养成愈伤组织，从中提取紫杉醇，进行加工生产。
（1）胰蛋白（胶原蛋白）使肿瘤细胞分散开（2）生理盐水作为对照组（与紫杉醇形成对照）（3）糖（葡萄糖）氨基酸（4）（定期）更换培养液（5）肿瘤细胞的数目少于乙组（6）植物组织培养脱分化
湖北部分重点中学
花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。
据图回答下列问题：
（1）过程①所需的酶是。
（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
（3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是。原生质体经过再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
（4）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和植株的根尖，通过、、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。
（5）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4进行PCR扩增的结果。据图判断，再生植株1—4中一定是杂种植株的有。
对杂种植株进行接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
（1）纤维素酶和果胶酶（2）叶绿体
（3）保持原生质体完整性细胞壁
（4）双亲（或花椰菜和黑芥）解离漂洗（5）1、2、4（6）黑腐病菌
广东韶关调研
图1描述了“白菜－甘蓝”幼苗的培植过程；图2反映了某个细胞周期不同时期染色体的状态。请据图回答：
（1）过程①的关键操作是去除______，所用的酶包括_________；过程②中原生质体A和B能融
合，说明细胞膜具有_________的特点。
（2）过程③中某个细胞周期内细胞中染色体的行为变化在时间上的顺序为__________（根据图2
中的字母填写）。
（3）甘蓝与白菜均为二倍体（2N）下图是培育能产生凝血因子牛的过程示意图，试回答相关问题：
（1）从良种母牛采集的卵母细胞，都需要进行体外培养，其目的是；从良种公牛采集的精子需后才能进行受精作用。
（2）在过程③中，当一个精子进入卵细胞后会激发卵子发生反应，如透明带反应等，其意义是。
（3）研制能够产生人凝血因子的牛乳腺生物反应器，需将目的基因导入牛受精卵，过程④最常用的导入方法是；获得转基因母牛后，如果即说明目的基因已经表达。
（4）过程⑥涉及的技术是，为保证该过程的成功，一般应选择相同的同种母畜。
（1）使卵母细胞成熟（或：使卵母细胞获得受精能力）；获能（2）防止多精入卵（3）显微注射法；牛奶中含有人凝血因子（或牛乳腺细胞已合成人凝血因子）（4）胚胎移植；生理状态
（当代中学生报2014模拟）
（1）哺乳动物的精子和卵细胞的形成过程中，同源染色体先联会，在联会时同源染色体的非姐妹染色单体间还常常发生__________，非同源染色体则_____________，使精子或卵细胞的遗传组成多种多样。卵细胞和精子发生上的重要区别之一，是卵泡的形成和在卵巢内的储备是在________（时期）完成的，初情期后再发生MⅠ和MⅡ。
（2）对于“试管动物”的正确理解是___________。（填写以下序号）
①属于无性生殖②属于有性生殖③体外受精④体内受精⑤体外发育⑥体内发育⑦运用基因工程技术⑧运用细胞工程技术
（3）从体内刚刚获取的精子必须经过___________处理才能与卵细胞结合形成受精卵，为获得更多的卵细胞需要给良种母畜注射适宜剂量的_____________。
（4）________________是防止多个精子进入透明带，阻止多精子入卵受精的第一道屏障，________________是防止多个精子入卵的第二道屏障。
（5）胚胎移植技术中供体的主要职能是__________，受体的主要职能是_________。
（1）交叉互换自由组合胎儿期（2）②③⑥⑧（3）获能（精子获能）促性腺激素（4）透明带反应卵黄膜封闭作用（5）产生具有优良遗传特性的胚胎孕育胚胎（妊娠、育仔）
湖南长沙二模
I、人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如下图1所示，请据图作答：
（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死雌鼠的中获取。
（2）图中的高血压相关基因作为，质粒作为，二者需用
切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有有关。
（3）子代大鼠如果和，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。
II、上图2是某科学家利用小鼠纤维母细胞等获得单克隆抗体的实验研究过程。请据图回答：
（1）①过程类似于植物组织培养技术中的过程。②过程的实质是_______。
（2）③过程中需用到的生物诱导方法是。
（3）④处需要筛选，其目的是。
I1）卵巢
（2）目的基因运载体同种限制性核酸内切酶(或同种限制酶)限制酶切割位点（2分）
（3）检测到体内有相关蛋白（2分）出现高血压（2分）
II、（1）脱分化基因的选择性表达
（2）灭活的病毒（3）筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞（2分）
福建宁德5月质检
利用乳腺生物反应器获取药用蛋白具有产量高、成本低等优点。下图为培育转基因奶牛获得
人血清白蛋白的流程。
请回答：
（1）PCR扩增人血清白蛋白基因使用的酶是。要使人血清白蛋白基因在转基因奶牛的乳腺细胞中表达，应将其与基因的启动子等调控组件重组。
（2）过程②包括技术和胚胎移植技术；可用技术获得多只与该转基因奶牛遗传物质相同的牛犊。
（3）若要检测牛奶中是否含有人血清白蛋白，可采用技术。
（1）热稳定DNA聚合酶（Taq酶）牛乳腺蛋白（乳腺蛋白）（写“人乳腺蛋白“不给分）
（2）早期胚胎培养（动物细胞培养）胚胎分割
（3）抗原-抗体杂交（写“抗原抗体杂交”、“抗原、抗体杂交”“抗体-抗原”不给分）
湖南师大附中
在畜牧生产中，人们利用多种方法促进优良畜群繁育取得了显著成绩，请就高产奶牛的快速繁育过程回答以下问题：
（1）克隆奶牛：从供体高产奶牛体内获得体绌胞后，对其进行的初次培养称为，培养的细胞在贴壁成长至充满培养皿底时停止分裂，这种现象称为，一般选取传代代以内的细胞（的细胞核）注人体外培养到期的受体去核卵母细胞内，通过使两细胞融合，构建重组胚胎，在体外培养并移入代孕母牛体内，从而获得与供体奶牛遗传物质基本相同的犊牛。
（2）试管牛：将体外培养成熟的卵母细胞与经法获能的精子在体外受精后，移入中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。通常将胚胎培养至期，取细胞做DNA分析性别鉴定，并将雌性胚胎移入的其他同种雌性动物的体内，使之继续发育为新个体。
湖南怀化模拟
下图为某转基因小鼠培育过程示意图，～表示相关过程。请回答：
1）过程注射的激素是____________，过程须进行_____________处理。
2）过程用到的工具酶有_____________，过程常用的方法是______________。基因工程的核心步骤是__________________。
3）过程的培养液中除了含有各种无机盐、有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸、激素等外，还要添加______________等物质。
4）过程通常采用的方法是_____________。为获得较多基因型相同的转基因小鼠，常采用______________的方法。
湖北省夷陵中学
羊绒素有“软黄金”之称，内蒙古绒山羊和辽宁绒山羊是我国的两大产绒品种。我国生物学家运用现代生物技术培育出了转基因绒山羊，其过程如下图所示：
1）在辽宁绒山羊细胞中获取的IGF-I基因在导入胚胎干细胞之前须，这是基因工程操作的核心步骤，若该过程使用的质粒是双链闭合环状的DNA分子，用两种识别序列不同的限制酶M和N切割（识别序列和切割位点如下右图），通过凝胶电泳分离分析得下表。
则：①在该质粒中，M酶与N酶的切割位点分别有个。
②M酶与N酶切出的能相互粘连的末端在酶的作用下相互连接，请将连接的结果表示出来：；连接后的序列是否可以用M酶、N酶进行切割：。
2）胚胎干细胞(ES)可由囊胚的分离培养获得，转基因胚胎干细胞培养过程中，须保持培养箱中含有5%的CO2的目的是。所配制的培养液除了含有各种营养成分，满足适宜的温度和酸碱性外，还应注意调节培养的，否则将影响细胞的正常生命活动。
3）干细胞经扩大培养诱导分化为早期胚胎，随后即可植入经处理的代孕母羊体内。
(1)构建基因表达载体或否(2)内细胞团(3)同期发情
过程①中，利用限制酶MluI、NheI处理以获得______________。
过程②的目的是使_________基因在_________细胞中特异性表达。
过程③中，从囊胚分离出_________，进行培养可获得ESC。
进行过程④时，_________（能/不能）在饲养层细胞上进行。
（1）a—MHC启动子
（2）EGFP心肌
（3）内细胞团
（4）不能
福建南平五月质检
科学家从129品系小鼠中成功分离出胚胎干细胞，并注入小鼠的囊胚，形成嵌合体囊胚，育出嵌合体小鼠。利用该技术，可获得表达绿色荧光蛋白（GFP）转基因昆明（KM）小鼠，操作流程图如下，请回答：
（1）在基因工程的操作中，携带GFP基因的病毒作为。
（2）步骤②中，利用荧光显微镜观察到细胞，将其取出，进行扩增培养。
（3）步骤③中，胚胎的收集方法称为。
（4）步骤⑤中，胚胎干细胞可以形成包括生殖腺在内的各种组织。
（5）图中X小鼠为小鼠。
福建三明五月质检
下图为牛胚胎性别鉴定和分割示意图。
请据图回答：
(1)为了控制牛后代性别，在胚胎移植前，最好取囊胚中_________的细胞进行性别鉴定。目前最有应用前景的性别鉴定方法是SRY(位于Y染色体上性别决定基因)-PCR法，其操作基本程序是：先从被测胚胎中取出几个细胞，提取DNA，然后用SRY基因的一段碱基序列作引物，以胚胎细胞中的DNA为模板，在没有ATP的情况下，将_________4种原料和热稳定DNA聚合酶等，加入PCR扩增仪中进行扩增，最后用_________特异性探针对扩增产物进行检测，若形成杂交带，则胚胎的性别为_________(雌性／雄性)。
(2)将胚胎甲分割成二分胚时，需注意的是_________，否则会影响胚胎进一步发育。
湖南师大附中
图I为利用生物技术生产单克隆抗体的过程，图Ⅱ为经体外受精培育优质奶牛的过程。请回答下列问题：
I．（1）I图制备单克隆抗体的过程，包括和动物细胞培养两个过程，在进行动物细胞培养时，首先要将动物组织剪碎，然后用处理，以使其分散成单个细胞，制备成细胞悬液。
（2）A细胞的特点是，经选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行和抗体检测，经多次筛选就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，进行体内或体外培养。
（3）单克隆抗体与常规抗体相比，具有的特点。
Ⅱ．（1）从母牛体内获得的卵母细胞需要培养到（时期）才能与精子受精。
（2）Ⅱ过程优质奶牛的培育过程需要进行胚胎移植，移植后的胚胎能在受体子宫中存活，其生理基础是。
（3）若要同时获得多头与此优质奶牛相同的小牛，可对Ⅱ中囊胚进行，操作过程需要特别注意的问题是：，否则会
影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
（4）在制备乳腺生物反应器的过程中，科学家利用限制酶和DNA连接酶两种工具酶将生长激素基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过等方法导入哺乳动物的受精卵中。若要检测该受精卵细胞内是否含有基因X，在分子水平上通常用作探针。
河北定兴三中
现代生物科技对人类生活、生产和社会发展的影响越来越大，例如：
(1)如图为经过体外受精和胚胎分割移植培育优质奶牛的过程，请回答：
进行胚胎分割时，应选择发育到________时期的胚胎进行操作。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意_______________________________。
(2)如图是胚胎干细胞的获取方法，请据图回答：
早期胚胎发育可以分为______________几个主要阶段，C、D细胞分别为______________和__________，它们的形态特征是__________。
(1)桑椹胚或囊胚胚胎分割要将内细胞团均等分割，以免影响分割后胚胎的恢复和进一步发育
(2)卵裂期、桑椹胚、囊胚、原肠胚内细胞团原始性腺细胞体积小、细胞核大、核仁明显
河北定兴三中
2010年10月4日英国剑桥大学的罗伯特·爱德华兹教授荣获该年度的诺贝尔生理医学奖，授予理由是“他使试管受精技术用于治疗不孕症成为可能，为占总人口比例超过10%的不孕夫妇带来了福音”。胚胎工程等生物工程技术正在改变着人类的生活。请回答下面相关问题：
(1)试管婴儿的奥秘，通俗地说就是改变精子和卵子的相遇方式及场所，通过诱发__________与__________在体外培养皿中完成受精作用。
(2)用来培养受精卵的营养液除水和无机盐以外，还需添加__________等物质。
(3)体外受精及培养过程需在__________℃条件下及无菌环境中进行。母体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生__________，这为胚胎在母体内存活提供了可能。
(4)为了确保受孕成功常根据母体年龄及健康状态移植__________。现在大多数人反对设计婴儿性别，原因是________。
(1)超数排卵获能的精子(2)维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清
(3)37免疫排斥反应(4)2～3个胚胎可能破坏人类正常性别比例克隆羊的成功轰动世界，它不仅奠定了疾病克隆性治疗的基础，又解决了器官移植中供体不足的问题，同时也给人类带来了一些过去尚未遇到的问题。下图为人类对克隆羊技术的拓展和应用图。
请据图回答问题。
(1)图中所涉及的现代生物技术有________________和________________等。
(2)图中两个婴儿长大后，外貌、性格和其他特征与原型男人相似，这说明________具有全能性。
(3)使用培养基进行胚胎干细胞培养时，通常要加入____________等天然成分，除了保证被培养细胞处于无菌、无毒及充足氧气的环境中，还需要保证细胞生活所需的________和________；早期胚胎发育到________阶段以前的细胞是全能细胞。
(4)图中从“内细胞团到胚胎干细胞”的培养过程中，必须用________处理内细胞团，使之分散成单个细胞。胚胎干细胞形成组织、器官必须要进行细胞的分裂和________。
(5)在体外培养胚胎干细胞能否获得动物器官？________。为什么？_____________________________________________________________________。(1)核移植胚胎移植(或胚胎分割、细胞培养等)
(2)动物体细胞核(3)血清温度pH桑椹胚(4)胰蛋白酶分化(5)不能胚胎干细胞在体外培养条件下可以增殖但不发生分化
河北唐山一中
下图可表示细胞融合技术的一些过程，请据图回答：
（1）若A、B到C的过程是体外受精过程，则精子必须先进行处理，常采用的方法是和。若此过程是体内受精过程，则胚胎发育到
阶段可进行冲卵。
（2）若A、B细胞为植物细胞，降解脱掉细胞壁的酶可能是__酶。A、B到C细胞的过程中，常用的物理方法是。
（3）若该过程是制备单克隆抗体的过程，在A、B到C的过程中，A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为能产生抗体的B淋巴细胞，那么D细胞称为___细胞，这种细胞的特点是。从融合细胞中选择出它的方法是在特定的培养基中培养，筛选出该类细胞后还需进行和经多次筛选可获得数量足够的能分泌所需抗体的细胞。
(3)Ⅲ过程中必须使用的工具酶有限制酶和________。
(4)过程Ⅳ得到的小鼠畸胎瘤中里面全是软骨、神经管、横纹肌和骨骼等人类组织和器
官。实验时，必须用x射线照射去除胸腺的小鼠，获得免疫缺陷小鼠，其目的是使小鼠______________。
河北石家庄一模
(1)胚胎工程是对动物或所进行的多种显微操作和处理技术。
胚胎工程任何一项技术获得的胚胎，还需通过 给受体才能获得后代。
(2)哺乳动物的体外受精主要包括、和受精等几个主要步骤。若
要充分发挥优良母畜的繁殖潜能，可给供体注射使其排出更
多的卵子。
(3)精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入中继续培养，以检查受精状
况和受精卵的发育能力。
(4)胚胎干细胞是研究体外细胞分化的理想材料，它除了能从早期胚胎中分离外，还可以
从获得。胚胎干细胞在饲养层细胞上，或在添加抑制因
子的培养液中，能够维持的状态。
河北邢台二模
某科研公司应用一定的生物工程技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白以满足临床需求，大致过程如下图(说明：将人血清白蛋白基因导入“雌性奶牛胚胎”的细胞中，形成重组细胞①)。请回答下列问题:
(1)重组细胞(填“①”或“②”)实现了基因的重组，此技术的最核心步骤是。
(2)通过核移植技术最终产生克隆动物，体现了的全能性。胚胎工程操作中最后环节是。
(3)该过程培养的牛被称为克隆牛。与其相比，试管牛培育过程特有的生物技术是
(4)若将胚胚进行分割，将来发育成的多个子代小牛的基因型(填“相同”或“不同”)，操作过程需要特别注意的问题是。否则会影响胚胎的恢复和进一步发育。
(5)运用细胞培养技术可以从哺乳动物的早期胚胎中获得胚胎干细胞(ES细胞)，培养过程如下:早期胚胎内细胞团胚胎干细胞。在培养过界中，必须用处理内细胞团，使之分散成单个细胞，为了维持此细胞不分化的状态一般将ES细胞在细胞上或在添加抑制因于的培养液中进行培养。
(6)哺乳动物的胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及等物质。
（1）①（1分）基因表达载体的构建（2分）
（2）细胞核（1分）胚胎移植（1分）
（3）体外受精（2分）
（4）相同（1分）将内细胞团均等分割（2分）
（5）胰蛋白酶（1分）饲养层（2分）
（6）动物血清（2分）胚胎工程技术包含的内容很丰富，如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，其中供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是黄牛，请据图回答下列问题。
(1)克隆动物的培育过程中均会用到的生物技术有________、________。
()进行胚胎移植的优势是可以充分。在这项技术中，供体的主要职能变为只产生，繁重而漫长的妊娠和育仔的任务由受体取代，这就大缩短了供体本身的繁殖周期。
(3)应用2中牛完成体内受精的场所是________，刚种植在子宫内的胚胎其发育程度一般为________，胚胎种植后可以通过________从母体获得正常发育所需要的物质。
应用3中细胞C、D分别取自________、________。
若想进一步提高胚胎的利用率，采用________技术。
)请列举一例克隆技术在医疗方面的应用___________________________。
(1)动物细胞培养胚胎移植
输卵管桑椹胚或囊胚胎盘(4)原始性腺(或生殖腺)早期胚胎(囊胚的内细胞团)
（5）胚胎分割（2分）
（6）克隆器官用于器官移植，避免免疫排斥(其他合理答案也可)我国科学家通过Dazl基因的异位表达，最终在体外将小鼠胚胎干细胞同时诱导出了游动的精子和卵子。请回答：
1）胚胎干细胞可来源于囊胚期的或胎儿的原始性腺。其在体外培养能不断增殖、自我更新，在功能上具有发育的。
2）胚胎干细胞的培养和诱导等操作均需在严格的环境条件下操作，且配制的培养液通常需要加入等一些天然成分，还要向培养液中通入一定量的氧气和二氧化碳，氧气参与细胞代谢，二氧化碳可以维持培养基的。
3）若将诱导的精子和卵子进行体外受精，对精子进行处理，卵子需要培育到期。判断哺乳动物的卵子已经受精的重要标志是在卵膜和透明带的间隙可以观察到。
4）将早期胚胎培养到时期进行分割、移植可获得多个同卵胚胎，胚胎分割时要将内细胞团分割。1）内细胞团（2分）（1分）2）无菌、无毒（2分）（2分）3）减数第二次分裂中（2分）（2分）4）桑椹胚或囊胚（2分）（2分）
河北高三二模
如下图所示为农民采用的笼养蝇蛆法而形成的食物网。
（说明：鸡粪中含有较多的营养物质未被消化，因此可再添其它饲料养猪，以生态学的角度看，这是一个理想的生态系统）请据图回答：
（1）构成此生态系统，不可缺少的生物成分是。
（2）猪粪经过的作用，可被农作物再利用；猪粪中的氨经过_________(生物)的作用，形成NO3-和NO2-被农作物吸收。若在该系统中增加一个沼气池，该池中要接种的菌种的新陈代谢类型是。
（3）该生态系统是据、等生态工程原理建立的（要求回答其中2点）。
（4）人在该食物网中位于多个营养级，在人采食的食物中有可能有转基因食物，说出在转基因生物或其产品研究中应遵循的科学研究中的一项内容：。
（5）图中农民养蝇的主要目的是缓解农村“三料”中的缺乏问题。
1）生产者
（2）分解者分解硝化细菌异养厌氧型
（3）能量的多级利用、物质循环再生等
（4）把重组DNA的转移限制在遗传上具有特定缺陷的生物上等
（5)饲料
湖南怀化三模
下图是我国南方开始尝试的农业生态系统的结构模式图
生态能充分利用废弃物中的能量利用植物秸秆作原料生产的燃料乙醇，是一种“绿色能源”，为了提高植物秸秆的利用率，可以利用基因工程对微生物A进行改造，改造时先要用相同的限制性核酸内切酶同时切割和）我国是受荒漠化危害最为严重的国家之一。近年来，地区频受沙尘暴之苦，保护生态环境，大力开展植树种草、治理水土流失、防止沙漠化等是当前的紧要任务。
(1)据研究，________。
(2)在退耕还林、还草过程中，要注意树种、草种不要过于单一。这种做法所依据的主要生态工程原理是________________，其目的是提高生态系统的抵抗力稳定性。
(3)近年来大力推广的生态农业是一个自我维持的生态系统，其特点是保持和完善系统内的生态平衡，其设计的原则是能量的__________和物质的__________，以求得最大的生产力和可持________农业。
(4)某科研小组想利用基因工程技术培育抗旱植物用于治理水土流失。将抗旱基因导入植物细胞采用最多的方法是____________。要检测抗旱基因是否插入到受体细胞的DNA中，采用的是____________技术。若检测结果表明抗旱基因已经插入到受体细胞的DNA中，则培育的植株________(填“一定”或“不一定”)具有抗旱性状。
(1)水(2)物种多样性(3)多级利用循环再生无废弃物
(4)农杆菌转化法DNA分子杂交不一定
根据所学生物学知识回答：（1）要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的上。
（2）目前临床上使用的红细胞生成素（一种糖蛋白，用于治疗肾衰性贫血）主要来自基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（rhEPO）。检测rhEPO的体外活性需用抗rhEPO的单克隆抗体。分泌该单克隆抗体的细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成（3）在“试管牛”的培育过程中，采用激素处理可使良种母牛一次排出多枚卵母细胞，最常用的激素是。从良种公牛采集的精子需后才能进行受精作用、。
（4）生态系统内即使某个物种由于某种原因而死亡，也会很快有其他物种占据它原来的生态位置，从而避免系统结构或功能失衡。这体现了生态工程的什么原理A．协调与平衡原理B．物种多样性原理C．物质循环再生原理D．整体性原理下表为几种限制性核酸内切酶识别的序列和切割的位点。右下图，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位点。现用BamHⅠ和PstⅠ两种酶同时切割该DNA片段（假设所用的酶均可将识别位点完全切开），下列各种酶切位点情况中，可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状的是
A．1为PstⅠ，2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ，4为BamHⅠ
B．1为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ
C．1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ
D．1为EcoRⅠ，2为PstⅠ，3为PstⅠ，4为BamHⅠ____________________等调控组件重组在一起，然后与载体相连构建成为表达载体；再通过_________方法，将表达载体导入羊的______________，获得重组细胞。将获得的重组细胞培养成早期胚胎后，移植到经过_________处理的受体母羊子宫内。因为我们对细胞所需的营养条件还没有完全研究清楚，所以在早期胚胎的培养中，往往还需要添加__________。
（1）T—DNA染色体DNA（2）杂交瘤2
（3）促性腺激素获能透明带反应、卵黄膜封闭作用（4）B（5）A
（6）羊的乳腺蛋白基因的启动子显微注射受精卵同期发情 动物血清
湖北八校
（1）下列有关现代生物技术的有关叙述正确的是
A.基因工程与蛋白质工程都能制造出新的蛋白质
B.动物细胞培养时不一定需要添加血清
C.动物的早期胚胎发育依次经过受精卵、卵裂、桑椹胚、孵化、囊胚、原肠胚等阶段
D.DNA连接酶和DNA聚合酶都能使核苷酸之间形成磷酸二酯键，属于同一种酶
（2）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤，其中的核心步骤是；PCR技术扩增目的基因是基因工程中常用的技术手段，这一技术的原理是。
（3）植物组织培养的主要原理是植物细胞具有，具体过程是在和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
（4）克隆动物实际上是用方法得到的动物，也就是将一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育为动物个体。
（5）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理（至少答两项）：。
（1）B
（2）基因表达载体的构建DNA双链的复制
（3）全能性（1分）无菌（1分）去分化（脱分化）（1分）
（4）核移植卵母
（5）物质循环再生原理、物种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理、系统学和工程学原理（必须答全任意两个才给分）
重组质粒BPT
大肠杆菌
融合蛋白P-BPT
实验小鼠体内
特异性免疫应答
HBV重组基因
B
A
β-半乳糖苷酶基因
苏云金芽
孢杆菌
Ti质粒
Bt毒蛋
白基因
构建基因表达载体
转入组织
农杆菌感染培养
目的基因插入到染色体DNA中
油菜
图1：
③
②
①
①
图2：
abcde
间期前期中期后期末期时期
DNA数量
8N4N
妊娠
受精卵
早期胚胎
转基因牛
③⑤⑥
卵母细胞
精子
良种母牛
良种公牛
①
②
④
人凝血因子基因
–2–
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