干货分享 — 小鼠体外受精篇

导读

雌雄鼠长期合笼不能交配怎么办？想要短时间内产出大量同日龄的小鼠怎么办？笼位紧张但是需要大量扩繁怎么办?……不要惊慌，原来体外受精就可以完美解决以上所有问题。小编偷偷告诉你们哈，邦耀实验室的体外受精技术已经处于本行业领先水平喽，不仅C57BL/6小鼠受精率可达到90%以上，即使是受精率低的129S、BALB/c品系的成功率也不低呢！现在就跟随着小编一起来get这项新技能吧！

体外受精 (In Vitro Fertilization, IVF) 是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，英文简称为IVF。由于它与胚胎移植技术(ET)密不可分，又简称为IVF-ET。在生物学中，把体外受精胚胎移植到母体后获得的动物称试管动物(test-tube animal)。

随着技术的发展，体外受精技术现在已经比较成熟，并可解决您以下难题：

1.  需要得到大批量的同日龄小鼠；

2.  需要迅速扩繁，但雄鼠特别少；

3.  需要扩繁，但笼位紧张；

4.  雄鼠丧失交配能力，但需得到此雄鼠后代；

5.  普通级动物需净化为SPF级动物；

6.  冷冻精子复苏后，需要体外受精；

7.  显微注射需要大量的受精卵；

8.  需要得到大量原核期至囊胚期的受精卵。

体外受精基本过程包括卵子采集、精子采集、体外受精和胚胎移植等4大步骤！

如下为流程图：

图1： IVF的基本操作步骤

一、 卵子的采集

卵子的采集，一般会选择超数排卵的方式，即用激素处理雌性动物后，从输卵管中挑出卵团。具体操作为：准备3-4周龄雌鼠，于下午18点给每只小鼠腹腔注射10IU的PMSG（孕马血清促性腺激素），48h后再注射10IU的HCG（人绒毛膜促性腺激素），第二天取输卵管用于提供卵子。

二、精子的采集和获能

次日上午8点，挑选14-24周龄状态良好的雄鼠，脱颈椎处死，取附睾，用精细镊将精子团挤出后，把废弃的组织块挑出弃去，然后把精子获能皿放入培养箱中获能约1h！

图2： 精子获能

注：获能时的状态活力良好的精子会富集在获能滴边沿！

三、体外受精

1.  脱颈椎处死雌鼠，剪下输卵管，在矿物油中将卵团挑出，并将其引入授精滴；

图3：体式显微镜下挑取卵团

2.   精子获能1h后，将适量获能滴边缘的精子加入授精滴，进行体外受精。如下图所示，为体外受精过程：大且圆的是卵细胞，游动的是具备受精能力的精子，小的颗粒状的是颗粒细胞；

图4：精卵结合

3.  6-7h后，将胚胎从授精滴中挑出，清洗干净，放入KSOM培养滴中培养，可当天看原核或者次日看2细胞期胚胎的发育情况。第2天挑选状态良好的2细胞期胚胎进行统计，并计算受精率（受精率= 2细胞期胚胎数量/参与受精的卵的总量），等待移植或注射。

图5：2细胞期胚胎

四、胚胎移植

在体式显微镜下，将胚胎植入假孕雌鼠的输卵管中，每只假孕鼠大约可植入15个左右胚胎，移植后，注意进行适当的术后护理，耐心等待小鼠生产。一般胚胎移植后的19-21天，就有小鼠出生啦！

 图6：出生3天的C57小鼠仔们

常见问题解答：

1. 如何判断体外受精的成功率？

体外受精后，一般会观察到原核或者第2天观察到2细胞期胚胎，就可以初步判断授精成功！不过体外受精成功率与小鼠品系、基因编辑小鼠的基因型密切相关！如某些基因型受精率可达到99%以上，而某些基因型受精率50%就可以判断受精率较高了。

2. 影响体外受精有哪些因素？

影响体外受精的因素很多，试剂、环境、人员操作及精子状况等。如附睾较饱满的小鼠，精子状态较好，一般情况下受精率也较高。所以操作时，需要注意各个方面，才可保证实验成功！

3. 冷冻精子授精与新鲜精子授精有什么不同，需要注意什么？

冷冻精子需要在专用的复苏液中复苏，除去冷冻剂，才能进行体外受精，复苏需要注意使精子迅速经过冰点，减少冰晶对精子的损害，同时冷冻过程相当于精子获能过程；而新鲜精子体外受精需要精子在专用获能滴中进行获能，获能后的精子才有授精能力。

体外受精作为辅助生殖的一种，可以解决诸多难题！特别是，对于来之不易的基因工程鼠的繁育。作为协助及提供科研解决方案的生命科学实验室，邦耀实验室拥有SPF级动物房，多年小鼠体外受精的经验，熟练掌握小鼠饲养繁殖技术；同时成熟的基因编辑技术平台，可以高效靶向的构建模式动物（KO、KI及CKO等）；如果您的实验需要，可以随时和我们联系；如果您对体外受精还有任何问题，欢迎在下方留言或者进入技术交流群参与讨论！

邦耀实验室致力于开发基因编辑技术在肿瘤免疫（CAR-T）和遗传疾病中的治疗，利用完善的新药研发平台，进行小分子及抗体药物研发

想要和更多实验高手过招吗？

想要更加高效地解决你的实验难题吗？

诚挚邀请大家加入集各大高校和科研院所学者的“动物实验和肿瘤模型微信讨论群”。