（一）采集前准备
1．采血环境的准备：
为患儿和采血人员提供安静、整洁舒适、适宜操作的采血场所[9]。
2．采血物品的准备：
血培养采集前应检查下列物料是否备齐。（1）治疗盘；（2）一次性注射器或蝶翼采血针；（3）根据医嘱准备不同类型的血培养瓶（采集前应检查血培养瓶是否在有效期内、有无裂缝、培养基是否足够、有无变质或者浑浊）；（4）消毒剂（如：70%异丙醇、0.5%葡萄糖氯己定、75%乙醇或含碘消毒剂，根据实际情况用于患者皮肤消毒或血培养瓶盖消毒）；（5）无菌棉签棉球、无菌胶布、止血带、一次性垫巾；（6）一次性医用乳胶手套、快速手消毒剂；（7）利器盒、分类垃圾桶、消毒液；（8）标识血培养瓶的用品。
3．采血人员的准备：
采血人员着装整洁，戴口罩，采血操作前须按照《手部卫生指南》（中国疾病预防控制中心）要求的七步洗手法进行手卫生[14]。
4．核对医嘱与患儿评估：
采血人员认真核对医嘱、检验项目和患儿姓名及住院号/门诊就诊卡号等。评估患儿身体状态、穿刺部位皮肤及血液供应状况。了解患儿是否正在接受影响检验结果的相关治疗，评估患儿是否处于血培养标本采集的最佳时机。告知患儿或陪同人采血目的、操作方法、配合方法，并取得配合。
（二）血培养标本采集流程
应严格执行血培养标本的无菌采集程序，具体采集流程如下。
1．患儿准备：
在保证安全的情况下，帮助患儿采取舒适的体位。
2．血培养瓶消毒：
去掉血培养瓶外盖，不能打开内盖,用70%异丙醇或75%乙醇浸渍棉签/球擦拭消毒培养瓶顶部（禁用含碘消毒剂），待其干燥[6,12]。
3．静脉穿刺点选择：
选择采血部位找到合适的血管，必要时可使用止血带。对于新生儿及小于4个月的婴儿行颈外静脉和头皮浅静脉采血，可采取侧卧位；3岁以上的儿童多行肘正中静脉或贵要静脉穿刺采血，以坐位采血为最佳。
4．采血人员手部消毒：
佩戴一次性医用乳胶手套，使用快速手消毒剂清洁双手1遍，仔细搓擦至手背、手心、手指等各处，1~2 min直至溶液完全挥发即可。
5．患儿皮肤穿刺点消毒：
从选定的静脉穿刺点螺旋向外环形画圈消毒，消毒区域直径达3 cm以上。每一次擦拭都使用新的棉签，总擦拭时间为1~2 min，待擦拭部位干燥后进行皮肤穿刺。具体消毒剂选择与消毒步骤如下[6]。
2个月以内（含2个月）患儿：70%异丙醇消毒后自然干燥；或75%乙醇棉签/球消毒30 s后，再用第二个75%乙醇棉签/球擦拭[6]，等待完全干燥。
2个月以上的患儿：采用一步法或三步法消毒。
一步法：0.5%葡萄糖氯己定作用30 s；或70%异丙醇消毒后自然干燥。
三步法：（1）75%乙醇擦拭静脉穿刺部位，待干30 s以上；（2）1%~2%碘酊或10%碘伏擦拭静脉穿刺部位，碘酊作用30 s或碘伏作用90~120 s；（3）75%乙醇脱碘60 s，待挥发干燥后采血。
注意事项：若使用含碘的消毒剂，一定要脱碘后再采集血培养。因含碘消毒剂可能导致新生儿亚临床甲状腺功能减退，新生儿禁止使用[15,16]。葡萄糖酸氯己定不可以用于2个月以下的婴儿进行皮肤消毒。
6．静脉穿刺与注入血培养瓶：
使用一次性注射器或蝶翼针进行静脉穿刺采血，注入血培养瓶。
如果使用一次性注射器采血，直接进行静脉穿刺，收集标本。
如果使用蝶翼针采血，推荐同时使用蝶翼针配套的采血适配器采血。采集过程中保持血培养瓶直立，按照瓶子上的刻度线准确采集血量。
注入血培养瓶后，轻轻上下颠倒几次，使血液与培养液充分混合，以防血液凝固。并在培养瓶上标注唯一标识。
7．止血：
在针头从静脉移除后，将无菌棉球贴或敷料覆盖穿刺部位并按压（一般按压3~5 min，高血压、出血异常或正在采取抗凝治疗等的患者需要按压5 min以上）[17]，以防止静脉淤血。
8．第二套血培养采集：
采集第二套血培养时需更换穿刺点，重复上述3~7步骤进行采血。
9．采血后患儿的安抚：
采血后帮助患儿采取安全舒适的体位，同时观察患儿有无不适，向患儿或陪同人告知采血后注意事项。
10．采血后物品整理：
整理好采血使用物品，并对废弃物进行分类处理。
11．标本保存和送检：
血培养标本采集后室温保存，并尽快送检[6]。
（三）注意事项
推荐直接采集静脉血，不推荐采集导管血用于血培养（除非需评估该导管导致的相关性血流感染的情况）[6]。推荐单独采集静脉血进行血培养，如果与其他检测项目同时采血，应首先采集血培养，以避免污染。
为了避免采集者手部污染采集区域（即使戴着手套），一旦患儿静脉穿刺点皮肤消毒后，不要接触采集部位。在穿刺前或穿刺期间，如需固定静脉，可戴无菌手套操作，以便防止静脉滑动。
将血液直接注入血培养瓶，中途不要更换针头。
不可将抗凝血注入血培养瓶。
应按照血培养瓶上标注的采血量采集血标本。因为血培养瓶的负压较大，容易造成过量采集，因此采集者在使用蝶翼针采血时需将血培养瓶直立，并实时观察采集量，切勿过量采集！
进行厌氧菌培养，需先排空注射器前段空气后再将血液注入厌氧血培养瓶。
