PCR上岗证培训—历年考试知识点

文章来源：检验医学

在我国新冠病毒疫情防控进入常态化的今天，核酸检测也越来越普及越来越重要。6月8日，国家卫健委发布了《关于加快推进新冠病毒核酸检测的实施意见》，文件提出：二级以上医院应具备开展新冠病毒核酸检测能力。

这就意味着全国大量医疗机构需建设PCR实验室。那么建设PCR实验室过程中最主要一点就是人员资质培训，实验室成员必须经过相关培训并通过考核。现将历年理论考试知识点总结如下，供大家参考。

Q

PCR实验室建设、认证审核依据：

A

《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫办医政发〔2010〕194号）、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》

Q

临床基因扩增检验实验室技术审核流程包括：

A

申报、资料审核、现场验收、整改、通知审核结果。

Q

临床基因扩增实验中质量保证：

A

室内质控（重复性）和室间质评（准确度）。

Q

PCR技术的发明人是：

A

Kary Mullis。

Q

核酸包括两种类型：

A

脱氧核糖核酸（ATCG）和核糖核酸（AUCG）。

Q

根据遗传中心法则，遗传信息的流动方向为

A

DNA⇔RNA⇒蛋白质。

Q

临床基因扩增检验实验室一般包括四个分区：

A

试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。

Q

核酸样品含量可根据（   ）处波长的吸光度算出。

A

260nm

Q

核酸样品纯度可根据（   ）处波长的吸光度比值算出。

A

260/280nm

Q

cfDNA是指

A

细胞游离DNA，ctDNA是指循环肿瘤DNA。

Q:

PCR检测用的试剂应当

A:

经国家药监局批准。

Q:

医疗废物垃圾袋结扎采用

A:

“鹅口颈”套扎结扎。

Q:

锐器盒容积达到总体积的（   ）时需要更换。

A:

3/4

Q:

PCR中，全血样本采集一般

A:

使用EDTA或枸橼酸盐抗凝，不使用肝素抗凝。

Q:

Taqman探针两端标记有

A:

荧光基团和淬灭基团。

Q:

新冠病毒核酸检测应该

A:

在Ⅱ级生物安全实验室开展，同时采用生物安全Ⅲ级实验室的个人防护。

Q:

PCR基本反应过程包括

A:

变性、退火、延伸。

Q:

核酸的基本结构单位是：

A:

核苷酸，其组成包括碱基、核糖或脱氧核糖和磷酸。

Q:

DNA双链中

A:

碱基A-T之间以两个氢键相连，G-C以三个氢键相连。

Q:

PCR试剂盒中

A:

加入尿苷糖基酶（UNG）具有防“污染”作用。

DNA变性是指在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中其他共价键不受影响。

自制室内质控品时，应对质控品的均匀性和稳定性进行评价。

PCR的测定点在PCR的指数扩增期，非平台期。

临床检验中的随机误差通常表现为质控物测定结果的SD增大。

核酸溶于水，不溶于乙醇等有机溶剂。

核酸的解链温度（Tm）与G+C含量有关，G+C含量愈大，Tm愈高。

以次氯酸为主要成分的清洁剂在配制后24小时内使用。

质量管理体系要素包括质量方针、质量目标和质量指标。

核酸的复制是由5’-3’方向进行。

DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。

Q:

核酸提取纯化中，RNase潜在污染源是：

A:

实验室环境、实验用品如吸头、离心管等、实验人员的手。

Q:

生物安全水平的级别共分为

A:

四个等级。

Q:

PCR出现基线漂移的可能原因有：

A:

蒸发、探针水解、相邻荧光通道干扰等。

Q:

常用RNase抑制剂是

A:

DEPC（焦碳酸二乙酯）。

Q:

Sanger测序体系与PCR反应体系的主要区别是

A:

前者含有：ddNTP

Q:

mRNA约占总RNA的

A:

5%

Q:

核酸检测对标本采集容器的要求是：

A:

密闭、一次性、无DNase和RNase、无菌。

Q:

肝素是TaqDNA聚合酶活性的

A:

强抑制剂。

Q:

PCR采用内标可识别扩增检测的

A:

假阴性、假阳性。

Q:

Taqman荧光探针常用的荧光基团是：

A:

FAM,TET, VIC, HEX。

Q

新检测系统（   ）情况下应进行性能验证。

A

常规应用前、常规使用期间（定期）、更换试剂、仪器、校准品溯源性改变、仪器搬迁、设施、环境严重失控等

Q

PCR室内质控品的浓度设置：

A

弱阳性质控（浓度为检测限2-4倍），阳性质控，阴性质控品。

Q

生物安全柜、超净工作台、通风橱三者的区别：

A

Q

阳性室内质控品出现假阴性失控的常见原因分析：

A

（1）核酸提取中的随机误差，如核酸提取中的丢失，有机溶剂的去除不彻底，标本中扩增抑制物的残留，所用耗材如离心管有PCR抑制物等。

（2）仪器的问题，如扩增仪孔间温度的不一致性，孔内温度与所示温度的不一致性等。     

（3）试剂的问题，如Taq酶和/或反转录酶的失活，探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率等。

Q

阳性室内质控品出现假阴性失控的常见原因分析：

A

（1）扩增产物的污染

（2）临床标本的核酸提取过程中发生的样本间的交叉污染。

（3）喷枪等关键耗材污染

（4）试剂污染

（5）仪器故障

Q

出现实验室污染怎么办？

A

（1）开窗通风

（2）用次氯酸钠溶液清洗地面，实验台、墙面

（3）增加紫外灯照射时间

（4）用75%乙醇空中喷雾等方法去除

（5）每天进行上述过程，直到污染消除。