|
十全大补汤配伍不同剂量肉桂对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞的影响 北京中医药大学 | 唐莹 研究背景 慢性难愈性创面是指创面愈合过程不能以可预见的生物学步骤,按时相规律有序地进行组织学修复,从而引起创面经久不愈的疾病。这类创面具有病程长、对外观影响大及并发症多等特点,对患者的生活和工作质量造成了极大的危害,一直是临床中较为棘手的问题,已引起国内外学者的高度重视并逐步开展了多项研究。随着认识的深入,氧化应激对创面愈合的影响正日益受到重视。氧化应激是促氧化剂和抗氧化剂稳态失衡,自由基的产生增多,和(或)抗氧化能力下降的一种机体状态。过度的氧化应激可引起组织损害,导致创面愈合延迟甚至长期不愈。 真皮成纤维细胞是创面愈合过程中主要的修复细胞。慢性难愈性创面中由于氧化应激的存在,过多的活性氧可对成纤维细胞造成氧化损伤,影响其生物学特性,使之不能发挥正常功能。近年来,针对成纤维细胞在创面愈合中作用的研究逐渐增多,同时对于中医药促进创面愈合的实验研究亦有了很大的发展,研究中医药对成纤维细胞氧化损伤的调节作用可从细胞水平上阐述中医药对慢性难愈性创面愈合的作用机制。 临床上,中医药在治疗慢性难愈性创面上独具优势。中医认为,慢性难愈性创面属于“阴证溃疡”,治疗上宜遵循补益的治疗原则。在补益基础上,适当配伍温通药物能够提高药物的疗效,但温通药物使用过量亦会起到相反的作用,因此温通药物的使用剂量是比较关键的问题。 十全大补汤是补益温通的代表方剂,由大量补益气血药物和少量温通药物——肉桂组成,临床上常被应用于治疗慢性难愈性创面。同时,实验研究表明十全大补汤具有提高机体抗氧化能力的作用。 目的 探讨十全大补汤配伍不同剂量肉桂对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞的调节作用,从细胞水平研究十全大补汤配伍不同剂量肉桂对氧化应激介导的慢性难愈性创面的作用机制。 方法 采用原代培养组织块法获得大鼠真皮成纤维细胞。采用十全大补汤原方及调整肉桂剂量所得的三组方药灌胃Wistar大鼠,制备5组不同的含药血清,分别为正常对照组、去肉桂组、原方组、2倍肉桂组及4倍肉桂组。采用一定浓度的H2O2刺激大鼠真皮成纤维细胞,制备细胞氧化损伤模型。用各组大鼠血清对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞实施干预,采用MTT法检测四组药物对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞增殖的影响；采用PI单染法和PI/Annexin V双染法结合流式细胞术检测四组药物对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞周期和凋亡的影响；采用DCFH-DA探针和JC-1探针结合流式细胞术检测四组药物对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞细胞内活性氧水平和线粒体膜电位的影响。 结果 1、浓度在100-1000umol/L范围内的H202刺激大鼠真皮成纤维细胞30min,可明显抑制细胞增殖,细胞增殖抑制率(IR)随H202浓度增高而依次增高。当H202浓度为500umol/L时,IR约为50%,可作为诱导细胞氧化损伤的合适浓度。 2、500umol/L H2O2刺激大鼠真皮成纤维细胞30mmin后,MTT法测得的OD值明显降低；GO/G1期细胞比例明显增高,S期和G2/M期细胞比例明显降低；细胞凋亡率明显增高；线粒体膜电位明显降低；细胞内活性氧水平显著上升。 3、MTT法检测细胞增殖结果中,氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞给予药物干预24h后,10%血清浓度组中2倍肉桂组和4倍肉桂组OD值升高；15%浓度组中2倍肉桂组OD值明显升高。药物干预48h后,5%浓度组中2倍肉桂组和4倍肉桂组OD值明显升高；10%浓度组中2倍肉桂组OD值明显升高。在四个用药组中,2倍肉桂组在两个时间点上的OD值均为最高。 4、细胞周期检测结果中,氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞给予药物干预24h后,四个用药组G0/G1期细胞比例均显著降低,S期和G2/M期细胞比例均显著增高。药物干预48h后,原方组、2倍肉桂组和4倍肉桂组G0/G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例增高。在四个用药组中,2倍肉桂组在两个时间点上的细胞增殖指数均为最高。 5、细胞凋亡检测结果中,氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞给予药物干预24h及48h后,四个用药组细胞凋亡率均明显降低。在四个用药组中,2倍肉桂组在两个时间点上的细胞凋亡率均为最低。 6、线粒体膜电位检测结果中,氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞给予药物干预24h后,只有2倍肉桂组明显提高了线粒体膜电位。药物干预48h后,四个用药组对线粒体膜电位无明显影响。 7、活性氧检测结果中,氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞给予药物干预24h及48h后,四个用药组活性氧水平均显著降低。 结论 十全大补汤配伍不同剂量肉桂可以通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、清除细胞内活性氧的途径,对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞起到保护作用。其中,在十全大补汤原方基础上适当增加肉桂剂量,则其发挥的保护作用更加显著。 机 构: 北京中医药大学 领 域: 中药学； 关键词: 过氧化氢； 肉桂； 十全大补 |
|
|
