蛋白质与DNA相互作用研究中的染色质免疫沉淀技术（ChIP）目前体外诊断技术主要是在体外实验中研究各种生物大分子如DNA、酶、抗原抗体等的功
能和特性，虽然可以用生物缓冲液及各种辅助试剂模拟体内环境，但这并不能完全反应生命体或者活体细胞内的真实情况。在这个方向上，染色质免
疫沉淀技术ChIP则取得了突破。染色质免疫沉淀技术（ChIP）通过与染色质片段共沉淀和PCR技术，在体内检测与特异蛋白质结合的DN
A片段。ChIP技术最大的优点就是在活体细胞状态下研究了蛋白质和目的基因结合状况，减少了体外实验的误差。在活体细胞中，先对与调节蛋
白结合的染色质进行分离，然后通过一定的方法（例如：超声波）随机剪切染色质，用调节蛋白的抗体沉淀目的染色质，再通过一定手段把目的染色
质上的蛋白质去除掉，最后用PCR等方法检测鉴定共沉淀的DNA片段的特性。实验需准备的有真空设备、涡旋器、液氮、冷冻离心管、离心机、
超声波粉碎仪、miracloth、37%甲醛，2M甘氨酸，ddH2O，剪切的鲑精DNA/proteinA琼脂糖珠(Santc
ruz)，蛋白酶K（14mg/ml），RNaseA，酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），氯仿，无水乙醇；提取缓冲液（10mMT
ris-HCl，pH8.0），核裂解缓冲液（50mMTris-HCl，pH8.0，10mMEDTA），ChIP稀释缓冲液，洗脱液
，TE缓冲液（Tris-HCl和EDTA）等。实验步骤包括甲醛固定，超声波破细胞，免疫沉淀，交联逆转，DNA纯化和DNA鉴定等步
骤。传统方法如转录因子结合实验、电泳迁移率变动分析、DNAseI足印法、酵母但杂交系统等都无法提供证据证明这些变化是受某个蛋白因
子直接调节的，还是间接的其他变化导致的结果。所以，要想提供蛋白因子直接调控的证据，就要直接检测蛋白质-DNA的相互作用。染色质免疫
沉淀技术是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性，可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况
。ChIP技术也被用于研究RNA-蛋白的相互作用，其原理与DNA类似。德晟自05年就开始研发生产分离胶、肝素、EDTA钾盐等采血管
添加剂，以及体外诊断方面试剂，对色原底物TOOS、MAOS等新型Trinder''s试剂、Bicine、Tris等生物缓冲剂及鲁米诺
、吖啶酯等化学发光试剂有着较深的研究，在自主研发及合成方面具有专业优势。湖北新德晟材料科技有限公司 |
|
