单味中药治疗幽门螺杆菌的动物研究

单味中药治疗幽门螺杆菌的动物研究

王建平，彭孝纬

福建医科大学省立临床医学院消化内科，福建福州350001

【摘要】

目的

研究单味中药治疗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Ⅳ．P咖一)的疗效。方法 建立感染Ⅳ．p咖^ssl株BALB／c小

鼠感染模型，将小鼠随机分成7组，每组25只，生理盐水(对照组)和黄连、黄芩、大黄、玄胡、紫珠水煎荆组及阿莫西林组(实验组)，

分别服药2周，停药4周后用胃黏膜组织Giems8染色法、快速尿素酶试验及日．p，，如一分离培养方法判断H．P咖“是否定植在小鼠胃

黏膜中，从而判定H p咖^是否根除，最终评价中西药根除日．p加一的疗效。结果对照组根除率为20％；而实验组小鼠中，黄连、

黄芩、大黄组根除率分别为76％、64％、68％，而玄胡、紫珠分别为28％、36％，阿莫两林组H．∥Drf根除率为80％，黄连、黄芩、大黄

组及阿莫西林组与生理盐水有明显差异(尸<O．05)，而玄胡、紫珠组与生理盐水组无明显差异(P>0．05)。结论黄连、黄芩、大黄

及阿莫两林对根除日．p咖一效果好，玄胡、紫珠根除日．pyfori的疗效差。

【关键词】 幽门螺杆菌；单味中药；阿莫西林；小鼠模型；感染

中图分类号：R573 文献标识码：A 文章编号：1006—5709(20lO)04一0345一03 收稿日期：2009-12·22

Inhibition ef耗cts of Chinese herbs on Helicobacter pylori in mice

WANG

Jianping，PENG

Xiaowei

Department

of

Gastroneterology，ProVincal Hospital

of Fujian Medical

UniVe玛ity，Fuzhou 35000 l，China

【Abstract】 objective

To study the inhibition effects of single chinese herbs on Helicobacter pylori infection in

mice．Methods

Mouse models of Helicobacter pylori infection(Ⅳ．p，，Zo—SSl units with BALB／c)were setup and sepa—

rated into seVen

groups，25

mice in eaeh

group，and

treated with no珊al

saline(matched group)，Goldthread，Scutel-

laria baicalensis，Chinese

rhubarb，Corydalis tuber，Callicarpa

water ecoction and

Amoxicillin(positiVe

control

group)

sepamtely

for 2 weeks．After another 4 weeks interval with no珊al

feeding mice were killed．Detection of厦p加矗infec-

tion in

gastric

mucosa of mice were

ped．omed

with Giemsa

st8ining，speed

umse

and日．p∥o^separation．ResuIts

The

eradication rates in nomlal

saline，Goldthread，ScuteUaria baicalensis，Chinese

rhubarb and Amoxicmin

groups

wgre

20％，76％，64％，68％and 80％sepamtely，while the mtes of Corydalis tuber and Callica印a water decoction were

28％and 36％separately．The日．p)，如一eradication rates in Goldthread，Scutellaria baicalensis，Rheum o伍cinale，and

Amoxicillin

group

were

higher than

that in nomal saline

group(P<0．05)，while no dif艳rence

in

Corydalis tuber and

Callicarpa groups compared

with no册al saline

contral(P>0．05)．

Conclusion

Goldthread，Scutellaria baicalensie，

Rheum o脏cinale，Amoxicillin have a

stmng e侬cacy of见py如一；Corydalis

tuber and

CaUicarpa

have a weak

emcacy

of

the鼠p，，幻^．

【Key words】

Helicobacter Pylori；single chine8e medicine；Amoxicillin；Mice model；Infection

且p咖一在1983年由Marshall等在慢性胃炎患者

的胃黏膜组织中成功分离培养，是微需氧的G’，日．p弘

如“感染是消化性溃疡和B型慢性胃炎的主要病因，

该菌同数种人类疾病有关，包括胃炎、消化性溃疡、胃

癌及黏膜相关性淋巴组织淋巴瘤⋯，世界卫生组织已

将其列为人类第一致癌源一1。日．P)，如“在全球自然人

群的感染率超过50％，我国的日．缈fori现症感染率范

围42％一64％，平均55％p o，因此Ⅳ．p，，Zori的根治成

为大家关注的问题。目前临床上以质子泵抑制剂加两

种抗生素为治疗托P加一感染的首选药物H1，但是临

床上日．p加^的根除率不高，首治根除率只有约70％，

补救疗法的失败率也有9％一lO％，主要原因是患者

对药物的依从性欠佳、副作用大和日益突出的抗生素

耐药问题。因此，根除日．pyzD一成为我们目前亟待解

决的问题，研究新的抗凰p伽矗药物已成为一项重要

的研究课题。近年来，国内外学者在研究替代抗生素

治疗日．p加矗感染上做了多方面工作，从中药等天然

药物中发现多种具有抗且咖矗的活性物质，为且扩

z0一感染的治疗开辟一条新途径。在我国，复方中药

在临床上应用很广泛，但其成份较复杂，无从知道到底

哪种单味中药发生作用，而且价格不比西药便宜，因

此，探讨哪螳单味中药能够抑杀n圳o“对临床选择

用药有参考意义。然而，目前大量的研究未能在动物

感染模型上进行，因此，我们建立日．p加以感染的动物

模型，初步探讨5种单味中药黄连、黄芩、大黄、玄胡、

紫珠对凰p，，如一的根除疗效。

l材料与方法

1．1实验动物 清洁级BALB／c小鼠由福建医科大

学实验动物中心购买于中科院上海实验动物中心，共

183只，雌性，6—8周龄，体质量18—20 g，委托福建医

科大学实验动物中心饲养。

1．2主要试剂与仪器日．圳o^(SSl)菌株由福建医

科大学微生物室馈送。5种单味中药水煎剂由福建中

医学院药学教研室提供，Giemsa染液购于厦门鹭隆生

物科技发展有限公司，快速尿素酶试剂盒购自福建三

明市三强公司，脑心浸萃液态培养基购买广东环凯微

生物科技有限公司，超低温保存箱(日本SANYO

Electeic Biomedical)o

1．3实验方法

1．3．1

日．pyfo^菌液制备：H．pyfo^(sSl)菌株接种在

含7．5％一10％无菌脱纤羊血、0．2％葡萄糖和l％抗

菌素液(含甲氧苄啶50 mg，万古霉素100 mg，多粘霉

素B 3．8 g)的脑心浸培养基上，37℃、微需氧条件下

(5％02、lO％c02、85％N2)培养72 h；用PBs将日．妒

lfD“洗去，给小鼠接菌种前，用快速尿素酶试验及革兰

氏染色法鉴定凰p加矗。

1．3．2模型制备：动物适应性饲养l d，禁食禁水12 h

后经口灌胃给予乙醇0．2 mL，2 h后恢复饮食饮水。

将预处理过的小鼠禁食12 h，经口灌胃给予SSl菌株

O．5

mL／只(浓度为l×109 cFu／L)，每隔2天一次，共

5次。末次灌胃6周后随机处死8只小鼠，在无菌条

件下，解剖取出鼠胃，沿胃大弯剪开。用无菌生理盐水

轻轻冲洗残留物后沿纵轴截取胃窦部分，后将胃窦切

为3部分，一部分进行且∥D^分离培养(组织研磨后

擦布于脑心浸培养基上，微需氧培养3 d，涂片革兰氏

染色镜检)，一部分用于组织病理学Giemsa染色，取下

小鼠胃黏膜组织用10％福尔马林液固定，流水冲洗5

—10 h，常规脱水、透明、石蜡包埋、切片5斗L。切片常

规脱蜡至水，经蒸馏水洗数分钟后，人Giemsa染液中，

操作按说明书进行，显微镜下观察，镜下见幽门螺杆菌

略呈“S”及短杆状。另一部分用于快速尿素酶试验

(操作及结果判断按说明书进行，显色lO min)，3种检

测方法中只要任何2种为阳性即认定小鼠胃黏膜有

H．Pyfo“定植，只有一种阳性为可疑感染，但不计算在

内，3项阴性者诊断为无只∥fDrf感染。结果8只小鼠

全部有日．pyfo^定植，因此，可以推断出另175只小鼠

均有鼠彬硎感染。

1．3．3动物分组及药物干预：175只小鼠随机分成7

组，每组25只，第l组对照组(生理盐水)。第2～6组

分别为黄莲、黄芩、大黄、玄胡、紫珠水煎剂组，第7组

为阿莫西林组。根据以下公式计算给药量：每只小鼠

给药量=(成人剂量×0．0026／20)×小鼠平均重量

(g)，每日2次经口灌胃，共2周，停药4周后处死所有

实验鼠，并进行解剖切取胃组织作执p灿“检测。药

物干预后判定小鼠胃黏膜是否仍有日．p咖一定植即采

用上述的评价方法，小鼠胃黏膜有日．P如一定植说明

该药物没有根除日．p加一，即药物无效，若无H．∥fo矗

定植，则该药物有效。

1．4统计学处理 应用SPSs 13．O统计软件包进行

数据处理，5种单味中药及阿莫西林组分别与生理盐

水组相比较，采用四格表资料的疋2检验，尸<0．05为

差异有统计学意义。

2 结果

2．1模型制备情况 从造模第5天开始实验鼠均看

到食欲不振、精神萎靡，对声音、光等刺激反应迟钝，皮

毛无光泽、蓬乱，体质量下降，第4周精神状态有所好

转，体质量开始回升，平均每周增加l一1．5 g／只。实

验过程中未见小鼠死亡。

2．2大体胃标本观察结果 末次经口灌胃菌液6周

后随机处死8只小鼠，解剖时均可见有轻微充血及炎

症，偶见黏膜糜烂、条索状出血和溃疡等改变。药物干

预后，黄芪、大黄、黄连组大多观察到小鼠胃黏膜轻度

充血，少见浅表溃疡形成，而其他组大多可看到黏膜糜

烂、出血、苍白，并可见溃疡形成。

2．3病理组织学检查结果 末次菌液灌胃6周后随

机处死8只小鼠并作病理组织学检查，Giesma染色见

所有小鼠的胃窦上皮细胞表层黏液、胃腺窝中以及上

皮细胞间可明显杆状幽门螺杆菌存在(见图1)，药物

干预后，黄连、黄苠、大黄及阿莫西林组小鼠做病理组

织学Giesma染色，大部分未见日．pyfo^定植在胃窦组

织(见图2)。

图l药物干预前胃爨病理组织表现：图2 药物干预后胃窦

病理组织表现(Giemsa

400 x)

Fig l PathoIo韶of g淞tric ant抛m tissⅡe before dmg inter．

ventioⅡ；Fjg

2

Pamology of gastric ant邝m tjssue after d邝g

interveⅡtion(Giemsa 4∞x)

2．4各组的日．刀如一根除率

如表l所见，黄连、大

黄、黄芪及阿莫西林组分别与生理盐水比较有统计学

差异(P<o．05)，而玄胡、紫珠与生理盐水比较无统计

学差异(P>0．05)，说明黄连、大黄、黄芪及阿莫西林

组对H．pyfo^有作用，而玄胡、紫珠对日．刀fD一无明显

作用。取黄连、大黄、黄芪及阿莫西林组中根除率最低

的黄芪组(64％)与玄胡、紫珠中根除率最高的紫珠组

(36％)作统计学分析(z2=3．92，P<0．05)有统计学

差异，说明黄连、大黄、黄芪及阿莫西林组比玄胡、紫珠

组疗效好。西药组阿莫西林(根除率80％)与中药组

黄连、大黄、黄芪中根除率最低的黄芪组(64％)作统

计学分析(z2=1．58，P>0．05)无统计学意义，说明阿

莫西林与黄连、大黄、黄芪比较根除率无明显差异。

表l 各组鼠删根除率的结果比较

Tab l The compari鲫n

of日．秽正口一erad妇tion

rate in昀ch

group

3讨论

国内外学者对于单味中药抗凰圳。一作用的研究

报道日益增多，大多学者用细菌培养的方法对具有抑制

或杀灭鼠咖H作用的单味中草药进行了筛选，经研究

证实大多发现抑菌作用明显的有黄连、黄芩、大黄、黄

柏、地丁、玫瑰花、土茯芩、山楂、高良姜，中度抑菌作用

的中药有乌梅、苍术、苦参，低度抑菌的有陈皮、玄胡、马

鞭草、虎杖、玄参、桂枝、柴胡。并对上述有抑菌作用的部

分单味中药测定其最低抑菌浓度，结果为黄连最强，其次

为大黄、黄芪等∞o。本研究在小鼠体内从5种单味中药

中筛选出的对且咖矗敏感的中药，基本符合大多数学者

的报道结果，但有些研究发现黄芪的抑菌作用弱，而本实

验中黄芪抑菌作用较强，研究中用到的单味中药紫珠，文

献报道很少，但从结果显示紫珠属于低度敏感。

目前，抗凰p加^的作用机理的研究取得一定的

成就。现代研究证实，黄连、黄柏、甘草抑制凰p咖H

生长，抑制胃酸分泌，服用后在胃黏膜表面能够形成保

护膜，促进溃疡愈合；黄连中含有小檗碱(berberine)为

季胺型异喹啉类生物碱，具有抗菌消炎、抗肠道细菌感

染等作用，其杀菌机制可能是抑制日．p咖^的生长与

呼吸，抑制葡萄糖及糖代谢中间产物的氧化过程，特别

是脱氧反应，从而杀灭细菌旧’。黄芪生肌固表补气，

提高人体免疫力，增强人体抗日．p伽^感染的能力。

大黄可减少胃液分泌，降低胃游离酸及蛋白酶活性，有

清除鼠p咖^作用，减轻炎症程度，改善溃疡部位微循

环，有利于溃疡的愈合。shih等研究发现三黄泻心汤

及其主要成分黄芪素能够通过抑制NF—KB的p50亚

基向细胞核的转移从而抑制NF．KB的活化，进而抑制

NO及IL一8的产生，达到降低日．P∥D矗引起的胃黏膜

炎症反应的作用¨1。我们能够从分子生物学的角度

深入探讨西药如克拉霉素、阿莫西林、甲硝唑、左氧氟

沙星、四环素及环丙沙星等治疗凰pyfo^的作用机制，

然而中药抗H pyfo^的机制还不是很确切，还很难从

细胞动力学、病理学、药理学、免疫学、分子生物学角度

深入研究。因而，如何在现代研究的基础上有新的突

破，是亟待解决的问题。

本研究是在动物模型上尽量模拟人体微环境进行

的，但动物与人存在个体差异，本实验的研究结果不能

代替临床上的治疗，有很大的局限性，但有一定的临床

指导意义。另外，本实验只从是否根除H p加ri来评

价中西药疗效，但未进行药物对小鼠胃黏膜炎症变化

的研究，存在明、显的不足，因此，在动物模型上研究单

味中药抗小鼠胃黏膜炎症反应或溃疡的愈合有较大的

临床价值，对临床上常见的慢性胃炎、胃溃疡也有一定

的意义。研究中只用到5种单味中药，然而中药作为

一个庞大的化合物资源库，很可能含有新的未知的抗

Jj『．pyfo一药物成分，因此，将来利用单味中药在动物模

型上结合现代分子生物学理论及技术大量筛选出能够

抑杀H训D一的有效成分药物成为可能，为扭P咖打

感染的治疗开辟一条新途径。

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