目的 采用 Gomori 醛品红和地衣红两种方法对比染色，以筛选出更有利于临床病理诊断的弹性纤维染色方法。方法 分别采用 Gomori 醛品红和地衣红染色方法，检测皮肤、肺和血管组织石蜡切片中的弹性纤维。
结果 Gomori 醛品红染色法结果显示，在皮肤、肺和血管组织中的弹性纤维均清晰可见，弹性纤维呈深紫色，背景色为不同程度的黄色，二者对比明显。地衣红染色法结果显示，上述组织中的弹性纤维呈深棕红色，与背景色区分度不太明显。
结论 Gomori 醛品红和地衣红染色均可用于显示弹性纤维，但在临床病理诊断中 Gomori 醛品红法优于地衣红法。 弹性纤维（elastic fibers, EFs）广泛分布于全身各处，在肺泡壁、动脉壁和皮肤尤其丰富。在 HE 染色中，弹性纤维和胶原纤维都呈红色，量少时两者较难区别。弹性纤维染色可用于多种疾病的诊断，如：观察动脉粥样硬化动脉壁的改变以诊断心血管疾病，鉴别肌上皮瘤与涎腺多形性腺瘤，诊断皮肤弹力纤维病变等。同时，弹性纤维也是肺泡及支气管的构成骨架，与肺癌的生长、分化、转移及预后均有极为密切的关系。常用的弹性纤维染色方法很多，各有其优、缺点。本文采用常用的 Gomori醛品红和地衣红两种染色方法对皮肤、肺和血管组织进行对比染色观察，以筛选出更有利于临床病理诊断的弹性纤维染色方法。收集中山大学附属第七医院2018年1月－12月来源于皮肤、肺和血管的含有弹性纤维的组织石蜡标本 90 例，全部组织均用 4% 中性缓冲福尔马林溶液固定（pH=7.0），常规脱水、透明、包埋及切片。每个组织均连续切取 2 张片，切片厚度均为 4-5μm。醛品红溶液：0.5g 碱性品红溶于 100ml 70% 乙醇中，再慢慢加入 1ml 浓盐酸和 1ml 三聚乙醛，紧塞瓶盖，轻轻摇匀混合，室温下放置约 1-2d（冬季约 4-5d）。观察溶液转变为深紫色，此时醛品红液成熟，可过滤于小口砂塞瓶，于 4℃冰箱保存备用。桔黄 G 液：2g 桔黄 G、5g 磷钨酸溶于 100ml 蒸馏水，摇匀混合，4℃冰箱保存。酸化高锰酸钾水溶液：A 液—0.5g 高锰酸钾溶于 100mL 蒸馏水，混匀倾入棕色瓶，置 4℃冰箱保存；B 液—0.5ml 硫酸溶液慢慢滴入 99.5ml 蒸馏水中，慢慢摇匀，切勿大力摇动，保存于玻璃瓶，4℃冰箱保存。A、B 两液分瓶存放，临用前分别取等量混合使用。2% 草酸溶液：2g 草酸溶于 100ml 蒸馏水，4℃冰箱保存备用。地衣红酒精液：地衣红 1g+70% 酒精 100ml+ 浓盐酸 1ml，先将地衣红溶于 70% 酒精，然后慢慢滴入浓盐酸，放置 1-2d 后即可使用。常规石蜡切片 5μm 厚，脱蜡至水，流水冲洗5min，蒸馏水冲洗 1min；
然后于组织中滴入醛品红液染 5-10min 左右， 70% 酒精反复洗涤 3 次，每次约20s，显微镜下观察切片不再脱色，背景对比清晰鲜明为止；最后用橙黄 G 液滴染约 2min，快速水洗，脱水、透明、封片。反复用 70% 酒精洗涤数次，显微镜下观察至切片不再脱色，背景清晰鲜明为止；Mayer 苏木素复染，流水冲洗返蓝 10min，脱水、透明、封片。Gomori 醛品红染色法结果显示，在皮肤（图1A）、肺（图 2A）和血管（图 3A）组织中的弹性纤维均清晰可见，弹性纤维呈深紫色，背景色为不同程度的黄色，二者对比明显。图 1 皮肤弹性纤维 Gomori 醛品红染色（A）和地衣红染色（B）。比例尺，50μm图 2 肺中弹性纤维 Gomori 醛品红染色（A）和地衣红染色（B）。比例尺，50μm图 3 血管中弹性纤维 Gomori 醛品红染色（A）和地衣红染色（B）。比例尺，50μm地衣红染色法结果显示，在皮肤（图 1B）、肺（图 2B）和血管（图 3B）组织中的弹性纤维呈深棕红色，背景色为不同程度的淡红色，二者反差相对较小，区分度不如 Gomori 醛品红染色法明显。弹性纤维是由集合成束的弹性微纤维和均质状的弹性蛋白组成的，弹性蛋白赋予弹性纤维弹性。在新鲜标本中，弹性纤维呈黄色发亮的细线条状；在 HE 染色下，组织细胞核呈蓝色，胞质、红细胞和胶原纤维等呈不同程度的粉红色，弹性纤维也被染成粉红色，导致在显微镜下很难区分到底哪些是弹性纤维、哪些是胶原纤维，不利于临床诊断。同时弹性纤维在肺腺癌、慢性支气管炎、动脉粥样硬化等病理状态下发生改变，由于增生、断裂而排列紊乱，更加导致对弹性纤维的辨认难度增加。弹性纤维的特殊染色方法有多种，Gomori 醛品红染色和地衣红染色这两种方法都能显示弹性纤维，但它们也各有优缺点。地衣红染色时，不仅染色时间长，一般需要 3h，而且 70% 酒精分化后，对比效果相对较差，在显微镜下观察分化效果时，背景中的红细胞、细胞核、平滑肌和胶原纤维也染上了色，背景脱色效果较差，弹性纤维与背景的区分度相对较差，容易影响结果判断，尤其是含出血、胶原纤维多的组织不易观察弹性纤维。
醛品红染色时，染色时间短，一般需要 10min，着色鲜艳、清晰，对比效果相对较好，染色结果比较稳定，特别在显示肺组织肺膜弹性纤维时非常清晰，对比度相对较好。Travis 等报道癌组织破坏脏层胸膜弹性层才能视为侵犯脏层胸膜，建议 HE 切片难以评价时，应加做弹性纤维染色进一步明确诊断。因此清晰地显示脏层胸膜对于临床诊断至关重要。醛品红染色具有较好的染色效果，但也需要注意一些细节问题。首先，醛品红染色的关键是醛品红液的配制，配制好的醛品红液需要静置 4-5d，待变为深紫色即为成熟方可使用，此液可保存 3-6 月，如染液时间过长，则染色时间要加长，但选染能力下降，会出现共染现象。其次，弹性纤维经强氧化剂酸性高锰酸钾氧化后，对于醛品红的亲和性大为增加，染色鲜艳，对比清晰，效果明显。根据笔者多年来的经验，在皮肤弹性纤维染色中，弹性纤维的形态是单条状，镜下不容易观察，弹性纤维经过氧化后着色鲜艳、清晰，对比度较好，但在脏层胸膜、动脉弹性纤维染色中，弹性纤维的形态是膜样结构，镜下容易观察，经过氧化后的弹性纤维和背景分别染为深紫色和浅紫色，对比不够鲜明。因此，经过反复优化，对于不同的组织我们采用不同的前处理方法，皮肤组织需经酸性高锰酸钾氧化、草酸漂白，而动脉、脏层胸膜组织可不经酸性高锰酸钾氧化、草酸漂白，可取得更佳的染色效果。另外，切片浸入 70% 酒精分化时，必须在显微镜下控制分化效果，时间不宜太久，否则弹性纤维着色较淡。综上所述，两种特殊染色方法均可用于检测组织的弹性纤维，但 Gomori 醛品红染色法具有颜色鲜艳，对比明显，结构清晰，更容易观察等优点，是优选的弹性纤维染色方法；同时，此方法可以缩短弹性纤维染色时间，提高弹性纤维染色效率，节省弹性纤维染色成本，值得在临床病理中推广，能够为临床病理工作提供一种观察弹性纤维的好方法。版权声明：本公众号发布所有内容，版权均属衡道医学病理诊断中心及相关版权方所有。未经允许，禁止任何形式的转载；如需转载请提前联系本公众号，并在使用时注明「来源：衡道病理」。
|
