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Tubulin porcine brain，T240-DX——微管蛋白（猪脑， 纯度>99%）采用Shelanski等人的方法从猪脑中纯化出微管蛋白，并用阳离子交换层析进一步纯化到99%以上的纯度。白色冻干粉供应。 一、Tubulin porcine brain的用途 主要表现在四个方面： 1.抗微管蛋白配体的IC50和EC50测定； 2.微管结合研究； 3.微管蛋白单体结合研究； 4.HDAC6研究； 5.微管激活的运动蛋白atp酶分析。 二、Tubulin porcine brain的材料组成 采用Shelanski等人的方法从猪脑中纯化出微管蛋白，并用阳离子交换层析进一步纯化到99%以上的纯度。白色冻干粉供应。 该产品具有完全的聚合活性，采用zhuanli技术进行冻干以提高稳定性和使用寿命。T240在4°C干燥条件下稳定1年。如果您的项目需要相同批次的微管蛋白以获得一致的结果，强烈建议您批量购买该产品，以节省时间和金钱。本品可替代我们的高纯度牛微管蛋白产品（Cat。#TL238、T238和T237），并以相同的方式工作。 三、Tubulin porcine brain的纯度 通过SDS-PAGE凝胶上的蛋白质扫描密度测定。样品纯度>99%。 四、Tubulin porcine brain的生物活性 微管蛋白的一个单位定义为5.0 mg纯化蛋白（由精密红色高级蛋白分析试剂cat测定）。#ADV02）。通过微管蛋白聚合试验评估T240的生物活性。微管蛋白聚合成微管的能力可以通过观察340nm处微管蛋白溶液的光密度增加来观察。当使用分光光度计路径长度为0.8 cm（1/2面积96孔板中的样品体积为180µl）时，一般微管蛋白缓冲液中的5 mg/ml微管蛋白溶液加上5%甘油和1 mM GTP，应在30分钟内获得0.75-1.10的OD340 nm读数。 需要注意的是，微管蛋白减去甘油在G-PEM缓冲液中不会聚合，直到微管蛋白浓度非常高（>10 mg/ml）。即使在这些浓度下，聚合也相对缓慢。在低浓度微管蛋白-甘油的情况下，可通过添加聚合促进化合物（例如甘油、紫杉醇或二甲基亚砜）实现高效聚合。 五、关于微管蛋白的两个问题
Q1：储存微管蛋白以确保zui大的稳定性和活性的正确方法是什么？ A：微管蛋白冻干产品的建议储存条件为4°C，并添加干燥剂，以保持湿度小于10%的湿度。在这些条件下，蛋白质可以稳定6个月。冻干蛋白质也可以在-70°C下干燥保存，在那里它可以稳定6个月。但是，在-70°C时，管盖上的橡胶密封件可能会破裂并进入湿气。因此，我们建议在4°C下储存。如果在-70°C下储存，如果使用这种储存条件，则必须在冻干蛋白质中加入干燥剂。按照指示重组蛋白质后，应将G-PEM缓冲液中的浓缩蛋白质等份，在液氮中快速冷冻，并在-70°C下储存（稳定6个月）。注：在液氮中快速冷冻微管蛋白是非常重要的，因为其他冷冻方法会导致活性显著降低。在室温水浴中快速解冻1分钟。避免反复冻融循环。 Q2：为什么细胞骨架推荐使用普通微管蛋白缓冲液和GTP来恢复微管蛋白？ A：为了维持微管蛋白和微管蛋白的构象，我们推荐使用GTP+tubulin单体。对于再悬浮，我们建议使用普通微管蛋白缓冲液（Cat。#BST01-001），包括80 mM管道，2 mM MgCl2，1 mM EGTA，pH 7.0，补充1 mM GTP（Cat。#BST06-001）。微管蛋白需要GTP和镁离子来维持适当的稳定性和构象，即使是单体状态。聚合过程中还需要GTP，因为它在微管蛋白聚合过程中的水解是发生聚合所必需的。EGTA是钙的螯合剂，是微管蛋白聚合的有效抑制剂。甘油通常被添加到5-10%的zui终浓度，以增强聚合；然而，甘油不是维持生物活性微管蛋白所必需的，在重组和储存微管蛋白时也不需要包含甘油。在对重组微管蛋白进行分批储存时，必须在浓度大于6 mg/ml的液氮中对微管蛋白进行等分和快速冷冻，以保持微管蛋白的生物活性。然后，应将等分试样储存在-70°C下。解冻等分试样时，应在室温水浴中快速解冻，并将其放在冰上，直到试验使用之前。 |
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