导语 Western Blot几乎是研究蛋白的童鞋必须get的实验技能,上一期文章和大家探讨了如何优化WB实验,详情请戳:『【干货收藏】WB结果不好,究竟哪儿出问题了?』WB的实验结果通常以图片的形式呈现,但是,蛋白条带并不是那么直观,因此需要将其量化,做成柱状图。 WB蛋白条带灰度分析的软件有很多,今天我们就为大家介绍一款免费软件:Image J。 文末有福利 Image J是一款功能强大且免费的图像分析软件!该软件基于Java平台,是NIH开发的免费图像分析软件,支持Windows、Linux和MacOS三大平台,在生物医学研究领域有着广泛的应用。Image J功能强大,有着如图像的区域大小和像素统计、细胞计数和灰度分析等诸多功能。今天为大家介绍的是利用ImageJ对WB结果进行灰度分析! 01 软件安装 1. 下载地址:https://imagej./ij/download.html 2.下载windows 32位带Java版本,双击软件安装 02 界面介绍 界面分为:菜单栏,工具栏和状态栏 ● 菜单栏包括:文件,编辑,图形,处理,分析,插件,窗口,帮助。 ● 工具栏从左至右的4种分别是:区域选择工具 ,直线选择工具,角度工具,点工具 03 图片分析 1.以下图作为样板图片 2.导入图片:File> Open> Sample.jpg 图片导入后,Sample.jpg在新的窗口中打开 3. 图片类型设置:Image> Type> 8 bit 4. 去除图片背景:Process> Subtract Background> … 5. Subtract Background 窗 口 :Rolling ball radius 设 为 50 pixels , 勾 选 light background,可选preview,点击“OK”确定 6. 工具栏:选择“矩形选框” 最大化“Sample.jpg”窗口,便于矩形选择,矩形选择第一个泳道 7. 标记“矩形选框”为1:矩形选择后,调整矩形至合适大小,按下数字键“1”,或者Analyze>Gels>SelectFistLane。我们可以看到黄色选框内出现了数字“1” 8. 选择“泳道2”:按住Ctrl键拖动“1”的矩形框,会出现两个矩形选框,拖动矩形框至泳道2,我们可以看到该软件自动复制了一个矩形选框,框选好第二个条带之后按数字键“2”,我们可以看到黄色选框内出现数字“2”;ImageJ会自动调整大小使“矩形框2”与“矩形框1”保持同一水平 9. 继续拖动选框到第三个条带,你以为这个时候要按数字“3”了么?那你就错了,这个时候还是按数字键“2”(注意:是按下数字键“2”),接下来的4-8条带均是按数字键“2”,这个地方有很多人会搞错,其实这些数字只是调用命令的快捷方式,并不是对第几条条带的标记,所以这样你就明白了吧 10. 所有泳道选择后,按下数字键“3”,这个时候会跳出包含多个曲线图的窗口 11. “直线”封闭峰:接下来,我们选择直线工具,将上述曲线封闭,如下图: 12. 计算峰值:工具栏>Wand(tracing)tool,点下刚才封闭的区域,峰值结果出现在新的窗口中 13. 计算结果: 14. 其他泳道,以此类推。 灰度分析后就是将各个条带的数据进行绘图,绘图软件可以选择Origin 或者Graphpad,小编将在后期分享相关的绘图软件操作,敬请期待,大家不要错过呦~ |
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