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为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入（十二烷基磺酸钠）。能使蛋
白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在的作用下会解聚成单条肽链，因
此测定的结果只是单条肽链的分子量。能与各种蛋白质形成蛋白质—复合物，
所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差
别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。
③缓冲液
在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液PH值
概念
基本保持不变的混合溶液。
作用能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响，维持基本不变。
缓冲溶液通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制
的配制得在不同PH范围内使用的缓冲液。
磷酸缓冲在本课题中使用的缓冲液是：磷酸缓冲液，其目的是：利用缓冲液模拟细胞内
液的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察红色和科学研究
（3）血红蛋白的提取和分离程序：
样品处理红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液
透析法粗分离除去样品中相对分子质量较小的杂质
纯化一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化
一般用—聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的相对分子质量，即
纯度鉴定
对血红蛋白进行纯度鉴定
5．凝胶色谱法操作
（1）洗涤
①洗涤目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，洗涤次数不可过少。
②洗涤操作：采集血样；低速短时间离心（速度越高和时间越长，会使白细胞和淋巴细胞等
一同沉淀，达不到分离的效果）；吸取血浆：上层透明的黄色血浆。盐水洗涤：用五倍体积
的质量分数为0．9％的氯化钠溶液洗涤。低速离心（低速短时间）；重复以上步骤三次，直
至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净。
（2）血红蛋白的释放：加蒸馏水到原血液体积，再加40%体积的甲
苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟加速细胞破裂，细胞破裂
释放出血红蛋白。
（3）分离血红蛋白溶液：
①过程：将搅拌好的混合液转移到离心管内，以2000r/的速度
离心10。
②试管中溶液层次：第1层（最上层）：甲苯层（无色透明）；第2
层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）；第3层（中下
层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）；第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。
③分离：用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明
液体。
（4）透析：
①过程：取1m的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300m的物质的量浓度
为20m/的磷酸缓冲液中（为7．0），透析12小时。②透析目的：除去样品中分子量
较小的杂质。
②原理：透析袋能使小分子自由进出，而大分子保留在袋内。
5
pHlmol
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min
min
SDS
SDSSDSSDS
SDS
SDSSDS |
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