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警惕!新冠核酸检测实验室的管理与技术风险

2021-02-26  yuxh91128


作者:周挺 

单位:西安交通大学第二附属医院检验科

根据《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册(试行第二版)》及《临床基因扩增实验室管理办法》,结合最近自己的工作,对核酸实验室存在的管理与技术风险进行分析如下:

一、技术部分
1、实验室污染的预防

PCR技术成熟、操作简单,最难进行控制的就是结果的真实性,对结果真实性影响最大的就是“假性”结果的出现,假阴性?假阳性?造成假性结果的根本原因就是“污染”。

一区重点防控自然环境中“酶”的污染,造成反应体系扩增效率降低;
二区重点防控标本之间的“交叉”污染,无法真实反应标本特性;
三区重点防范“产物”污染,在防范扩增产物对待检标本污染的同时,重点防护“产物”对一区、二区的污染。
在预防污染方面首先是物理空间上的分区“隔离”,其次是各种物品之间的“隔离”,第三就是在实验室运行过程中的管理规范。验收通过的基因扩增实验室在实际运行过程中,影响最大的是最后一条“规范管理”与有效落实。
2、标本采集、保存与转运容器过程

医学实验室质量管理过程属于管道流体过程,质量管理过程好比串联电路,任意一个环节的“开路”,对结果的影响都无法通过其他环节进行修复,越靠近上游对结果的影响越深远,甚至是“毁灭级”的。新冠核酸检测也不例外,标本本身的质量决定了核酸检测结果质量的“地平线”,组织大量的标本采集人员培训非常关键。注重对患者隐私的保护,人员信息录入对可以慢但必须零差错,信息化是有效的解决方案。标本保存容器的选择要与待送检的实验室检测方法相匹配。

在一定区域内可能同时存在多个实验室时比如医院、疾控中心,要及时了解各个实验室对保存方式的要求。标本是否需要进行灭活,是物理方法还是化学方法,是瓜氨酸盐还是离子活化剂;避免保存液混用造成的生物安全风险以及对检测结果造成的影响。同时注意在标本转运过程中存在的生物安全防范,随标本转运配备消毒液,避免突发事件造成环境影响。

3、检测体系的选择

目前市面上可供选的的检测体系较为庞杂,核酸提取设备、提取试剂,扩增仪器、扩增试剂种类较多,交叉使用现象较为普遍,简单要求使用配套体系存在一定的客观难度。实验室在检测体系选择上至少应该不频繁更换试剂方法,且对体系的检测能力进行确认或验证。对核酸提取富集程度与试剂盒的最低检测限进行匹配。针对核酸提取阶段对核酸纯度及效率进行确认与验证;在扩增阶段针对定性实验进行最低检测限、精密度、扩增效率等的确认或验证,同时对检测结果的符合率进行评价。必要时针对不同试剂厂家使用的引物序列在数据库中进行比较分析,分析可能存在的非特异性产物。

4、完善质控过程

内部质量控制除了选择合适的质控品的选择之外,需要深刻理解试剂对照空、阴性对照空、阳性对照以及第三方质控弱阳性质控的作用。在质控品检测的基础上,在内部质量控制过程中,要根据检测标本的类型选择不同检测方案。来源于人体的标本,应选用含有人管家基因的内源性内参,便于对核酸标本采集、核酸提取、基因扩增进行全程的控制;如果待检标本属于物表、冷链等非人体组织,需要在核酸提取环节增人工病毒或其他外源性内参,确保核酸提与扩增过程的质量得到有效管理,标本采集环节需要通过规范化培训来进行质量控制。及时参加外部室间质评活动,及时分析反馈结果,特别是成绩不理想时的原因分析,采取积极措施。

5、结果判断与异常曲线的分析

实验室工作人员应该仔细阅读试剂说明书,深入了解新冠检测试剂选择扩增区域ORF1a、ORF1b、N、E、M的生物学机制,并对结果进行判判断分析。同时能够通过RCR的基本原理,结合反应过程曲线进行有效的数据分析,特别是异常结果曲线的分析。对是存在抑制物、基线设置不合适,反应体系蒸发、翘尾,电压光源不稳定等异常曲线进行分析,进而选择从新采集标本进行提取扩增还是原管复查进行判断。

二、管理部分
1、重视人员培训与管理

新冠核酸检测实验室是目前医学检验实验室中工作强度最大、风险最高的专业组,应对已获得相应资质的人员加强培训及能力评估,特别是轮转人员。面对疫情各专业技术组织加强了核酸检测人员资格方面的培训,许多实验室人员能力参差不齐,缺少相应的工作经验。不建议实验室高频率、高比例的人员轮转,尽量确保人员的相对稳定。加强工作人员思想情绪及健康状态的管理,特别是在已经持续抗击疫情一年有余的现阶段,不过分造成劳动精神压力,不轻易放松防控意识。合理分配人力资源,凝聚人心、统一思想,不稳定、不牢固的团队很难保障检验质量。

2、强化制度规范与工作落实

由于PCR 检测技术的高灵敏性与特异性,奠定了其在新冠感染诊断及疫情防控过程中的重要作用。该项检测技术对实验室环境及运行管理规范提出了较高要求,假性结果的出现在很大程度上是管理、操作不规范造成的。在实际运行过程中要高度重视规章制度与技术的落实,避免实际工作与规章制度、SOP文件形成“两张皮”。对于新建实验室,在规范的基础上重点关注文件的规范性与可行性;已经长期开展核酸检测的实验重点关注文件的有效性与适宜性。特别是在大范围开展核酸筛查的“战时”,实验室的各项规章制度与SOP文件是确保新冠核酸检测结果可靠的依托,不能为了追求所谓“效率”牺牲质量管理体系的有效性。

3、完善设备设施维护与管理

核酸检测实验室使用的核心设备,如核酸提取仪、扩增仪、生物安全柜、移液器、高压阀等按照设备要求进行维护校准;对辅助设备如离心机、紫外灯等进行定期维护,确保设备性能稳定。设备在搬迁或移出实验室时,及时对设备进行去污染,避免转运过程中造成环境污染。

4、确保医废处理合理规范

已检测标本按照相关文件要求在一定时段的保存后按照要求进行无害化处理,不同实验室对标本是否已灭活,应采取不同措施。已灭活标本可以按照普通医疗垃圾程序进行处理;未灭活标本需高压后按照普通医疗垃圾啊处理,对高压过程压力以及效果进行检测。

综上所述,核酸实验室的安全、有效运行是核酸检测结果准确的基本保障,需要在技术与管理两个方面齐抓共管,提供系统解决方案。只有在日常工作中规范操作、科学管理,才能确保在患者诊治、疫情防控过程中发挥重要作用。

编辑:小冉  审校:Rose


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