AzureCielo?实时荧光定量PCR系统轻松实现6重RT-qPCR的准确检测介绍多重实时荧光定量PCR为研究多个靶点提供了许多优势。
首先，一次PCR检测多个基因省时省力，可以更快地获得结果，同时最大限度地减少使用耗材，如PCR管或板。此外，每个样本可以获得更多的
信息，这在样本量有限的情况下尤其重要。最后，由于RNA水平或基因拷贝数在同一反应中直接比较，因此不需要参比染料来校正孔或板之间的移
液差异。在多重实时荧光定量PCR中使用不同荧光标记的靶标特异性探针，可以在不同的荧光通道中检测各靶标基因。与需要进行凝胶电泳分析的
终点法多重PCR相比，这消除了对不同片段大小PCR产物的需求。此外，使用靶标特异性荧光探针的反应不会受到非特异性信号的干扰，而非特
异性信号一般可能来自次级PCR产物与染料(如SYBRGreen)的结合。▲图1：AzureCielo?新型的高性能光学检测系
统。采用16组光纤单孔扫描技术，可对16孔进行同时成像，以达到更快、更高效的扫描。多重实时荧光定量PCR已应用于多种研究，例如从基
因表达的研究到生物样品中潜在病原体的快速检测和鉴别等1-3。该技术非常强大，甚至已被优化应用到国际空间站微重力环境中4。最近，多重
qPCR还被广泛应用于SARS-CoV-2和甲型、乙型流感的鉴别诊断5。AzureCielo?实时荧光定量PCR系统最多可满足
6个靶标的多重实验需求。该系统采用16组光纤单孔扫描设计，特殊的激发/发射方式可确保在单孔扫描时仅激发孔内区域，通过消除光散射以消
除背景噪声和孔间干扰；而采用单一光源进行整板激发的检测系统，则会发生光散射，导致更高的背景噪音干扰和更少的光线激发样本（图2）。为
了提高速度，AzureCielo?实时荧光定量PCR系统可16孔同时成像，整个96孔板在9s内即完成6个荧光通道的扫描(图1)。
▲图2：单一光源可同时激发孔内和孔外区域，导致更高的背景噪音干扰和更少的光线激发样本。AzureCielo采用光纤单孔扫描，可
以消除光散射，提高了孔间数据的一致性。AzureCielo?实时荧光定量PCR系统的荧光检测通道兼容大部分qPCR染料可满足不
同实验需求（见表1）。▲表1：AzureCielo?实时荧光定量PCR系统广泛兼容多种qPCR化学染料。为了证明Azure
Cielo?实时荧光定量PCR系统的多重性能，使用人cDNA样本分别进行了单重及6重的RT-qPCR检测。方法单重RT-qPC
R实验：均使用人cDNA样本，配制各自的20uL单重PCR反应液，2次重复，进行6个荧光通道的检测。6重RT-qPCR实验：使用2
50ng至1.95ng的人cDNA样本两倍梯度稀释液，配制20uL的6重PCR反应液，2次重复，进行6个荧光通道的检测。表2中列出
了6个靶标基因和各自的探针类型。▲表2：6个靶标基因和探针类型。按照如下程序进行qPCR扩增：1x，95℃90s；45x，95℃
15s，60℃20s。采用绝对定量对数据进行分析，得到各个基因的Cq值和标准曲线。结果与讨论如图3所示，从单重RT-qPCR反
应的扩增曲线中看出，各通道之间均没有发生荧光信号溢出或串扰的情况。▲图3：在AzureCielo??6实时荧光定量PCR系
统上进行单重RT-qPCR反应，扫描所有通道的扩增曲线。6重RT-qPCR实验中各靶标基因的扩增效率和线性动态范围如图4所示，每个
靶标的扩增效率均接近100%，且标准曲线的R2值接近于1。▲图4：6重RT-qPCR实验中各靶标基因的扩增效率和线性动态范围。
以上结果表明AzureCielo?实时荧光定量PCR系统具有卓越的多重反应能力以及非凡的检测性能。同时6通道的设计极大程度上提高
了实验的灵活性，可选择多种染料类型，方便多重PCR的检测。AzureCielo?实时荧光定量PCR系统AzureCielo?
实时荧光定量PCR系统来自于美国AzureBiosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用
了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°
C的温度梯度；卓越的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校
准。AzureCielo?实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。参考文献：1.Va
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