文献速递丨naica?微滴芯片数字PCR精准检测核移植后的线粒体异质性，2.5小时快速获得结果线粒体疾病是线粒体基因组（mtDNA）发生基因
突变所导致的一类遗传疾病,仅通过雌性种系传播。通常，细胞中超过60%的线粒体DNA发生突变就会导致疾病，并且一个人的线粒体DNA
突变越多，其疾病就越严重，线粒体疾病目前是不可治愈的。▲图源：网络（侵删）目前核移植（NT），也称为线粒体捐赠，作为一种预防线粒体
疾病从患病母亲传给其后代的战略而受到了越来越多的关注。但由于核移植中含有少量细胞质来源的mtDNA，介导受体中mtDNA异质性改变
且伴有扩增，因此需要对mtDNA突变负荷进行准确定量，现用NGS测序方法局限性在于成本较高、耗时较长、数据处理复杂且信噪比较低。L
eber遗传性视神经病（LHON）最常见的母系遗传性线粒体疾病，比利时根特大学生物系专家团利用数字PCR(dPCR)平台对LHON
相关m.11778G＞A突变位点进行检测，并和NGS方法进行对比，探讨数字PCR在mtDNA异质性定量中的适用性。研究成果发表在
知名期刊《ClinicalChemistry》上。检测样本信息:为了评估dPCR在异质性评估中的适用性，共设置了3种类型的样品：
（i）具有很高突变负荷的患者样品13个；（ii）由健康志愿者捐赠的同质野生型样品3个；（iii）经过NT处理的样品，由于mtDNA
残留而携带低突变负荷，共6个样本。检测方法：通过处理，将样品突变负荷范围设置在50％至0.01％，进行分析验证。实验结论:??在d
PCR和NGS结果上观察到的突变率具有良好的一致性。?与NGS相比，dPCR具有更低的背景噪声。使用naica?微滴芯片数字PCR
系统，非患者样本中的突变等位基因没有阳性信号，符合预期。??和dPCR结果相比，在NGS结果中几乎所有异质样品的次要等位基因频率都
被高估，初步猜测NGS实验流程中可能引入了错误序列，经过PCR扩增改变次要等位基因频率。??相较于NGS，数字PCR成本低、操作简
便、结果直观、更适用于低频突变检测。??数字PCR方法适合用于核移植后线粒体异质性定量检测。▲naica?微滴芯片数字PCR系统检
测不同mtDNA样本二维图（FAM-突变型，VIC-野生型）左上：高突变负荷患者样本；右上：野生型样本；左下：NT后异质性样本；右
下：NTC▲Bland-AltmanPLOT评估naica?微滴芯片数字PCR系统检测结果和NGS结果一致性最后，文章concl
usion给出-数字PCR具有更多优势，适用于核移植后线粒体的异质性评估：▲图片来源：原文第8页期刊介绍：naica?微滴芯片数
字PCR系统法国StillaTechnologies公司的naica?微滴芯片数字PCR系统在进行核酸检测时具有独特的优势。该系
统利用cutting-edge微流体创新型芯片—Sapphire芯片（或高通量Opal芯片）作为数字PCR过程的耗材。样品通过毛细
通道网格以30,000个微滴的形式进入2D芯片中。3色荧光检测仪器，整个流程只需要2.5小时，并可进行数据的质控和结果追溯分析，获
得的数据真实可靠。naica?六通道微滴芯片数字PCR系统法国StillaTechnologies公司naica?六通道微滴芯片
数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。 |
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