1. 脱颈处死小鼠,腹部朝上正体位暴露小鼠右侧腹部。 2. 75%乙醇消毒,剪开腹部切取脾脏。 3. 将脾脏放入预先放置好cell strainer(FALCON,352350)并已加入5ml 无菌PBS的六孔板或培养皿中。 4. 用无菌注射器柄充分研磨脾脏。 5. 弃掉cell strainer,轻柔吹打细胞至充分重悬,收集到一无菌15 ml离心管中,于4℃ 400g,离心5 min。 注:一旦取出脾脏,请置于冰上操作。 6. 将第5步离心后弃上清的脾脏细胞用5 ml无菌ACK裂解液轻柔充分吹打混匀,于冰上裂解5 min。 注:ACK裂解液配方如下表,配好之后用0.22 μm的滤膜过滤,4℃保存不超过1月
7. 裂解结束后加入10 ml无菌PBS终止裂解反应,于4℃ 400g离心5 min。 8. 弃上清,用10 ml无菌PBS洗一次,弃上清后直接加入培养基重悬计数,一只脾脏可得3-10´107个细胞。 注:如果要进行下一步的分离CD4+T细胞操作,请直接按照说明书将细胞重悬在合适体积的PBS中。 |
|
来自: 生物学渣 > 《手术造模/疾病模型/下游服务/动物行为学》