基因编辑小鼠是指通过基因编辑技术对特定目标基因进行“修饰”,从而在小鼠体内实现DNA片段的删除或添加。基因编辑小鼠被广泛用于研究基因对小鼠功能的影响,也被用于构建各种疾病模型,模拟人类疾病的发生发展过程以及相应药物的研发。 基因编辑小鼠的制备方式主要有两种,一种是ES细胞囊胚注射,另一种是受精卵显微注射。无论哪种方式,基因编辑都是在受精卵水平进行操作,为了拿到基因编辑动物,则必须经过胚胎移植,在动物体内发育为完整的个体。 ● 基于采用ES细胞囊胚注射方式获得基因修饰小鼠的过程如下: 先对小鼠胚胎干细胞进行基因编辑,将基因打靶获得的阳性ES细胞进行囊胚注射,再胚胎移植到假孕母鼠体内获得高嵌合小鼠,高嵌合小鼠进一步与野生型小鼠进行交配,即可最终获得基因编辑小鼠。 Fig.1 采用ES细胞囊胚注射方式获得基因修饰小鼠的过程 ● 基于受精卵显微注射技术构建基因修饰小鼠的过程如下图所示, 主要包括:gRNA设计和筛选,sgRNA表达载体构建,显微注射,胚胎移植,小鼠繁殖等过程。 Fig.2 采用受精卵显微注射方式获得基因修饰小鼠的过程 |
|
来自: 生物学渣 > 《干货分享/行业资讯》