【原】基因修饰技术有哪些？

基因修饰技术

CRISPR/Cas9 技术

利用靶点特异性的 sgRNA 指导 Cas9 核酸酶在基因组上的特定靶点进行 DNA 双链剪切。通过非同源末端连接 (NHEJ) 可导

致移码突变，实现基因敲除；通过同源重组修复 (HR) 可将外源片段整合到基因组指定位点。

打破物种与品系的限制，可实现大片段敲除、多位点基因修饰，并缩短研发周期。

ESC 打靶

利用同源重组技术，在小鼠胚胎干细胞（ESC）中对靶基因进行修饰。将经遗传修饰的 ES 细胞引入受体囊胚中。经修饰的

ES 细胞仍具有分化全能性，可发育成为嵌合体小鼠的生殖细胞，使修饰后的基因被稳定遗传，获得基因修饰小鼠品系。

目前可用的小鼠 ES 细胞系主要有 3 种遗传背景：C57BL/6、129/S6、B6;129 。

高效转基因

通过显微注射技术，将外源 DNA 注射到受精卵中，外源 DNA 随机整合到受精卵基因组中，并遗传给后代，获得转基因动物。

借助转座子系统，大幅提高转基因的效率。在转座的过程中，转座酶识别位于转座片段两端转座子特异的 ITRs 序列，将两

个 ITRs 及其中间的片段整合到基因组上。