Cas9蛋白体外酶切实验 实验背景: CRISPR/Cas是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御,可特异剪切外源的病毒及DNA以对抗入侵。 Cas9 /gRNA系统通过sgRNA(short guide RNA)引导Cas9蛋白识别并剪切带有sgRNA靶点的双链DNA,用于基因敲除和精确编辑DNA等操作。 利用人工表达的Cas9蛋白和体外转录的sgRNA,可以体外切割质粒、PCR产物等双链DNA。可用于快速检测CRISPR靶点。 实验材料及仪器: Cas9体外酶切试剂盒 (北京英茂盛业,PC1400) sgRNA体外转录试剂盒(北京英茂盛业,PC1380) DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒(北京康为世纪,CW2302S) DM2000 DNA marker(北京康为世纪,CW0632M) 仪器:37℃恒温箱;台式冷冻离心机;水平电泳槽等。 PCR扩增切割底物: PCR扩增β-半乳糖苷酶基因中1164bp片段,命名为lac。 PCR扩增pUC57质粒中760bp片段,命名为57。 琼脂糖凝胶回收PCR产物,定量后稀释为0.2μg/μl。 |
|
来自: 生物学渣 > 《干货分享/行业资讯》