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苏木精伊红染色法（Hematoxylin-Eosin Stainning) 一、石蜡切片苏木精伊红染色法 含锇酸或重铬酸钾固定的组织，染色不够鲜艳，细胞质往往呈淡棕红色，可用Cowdry法漂白：切片入1%高锰酸钾水溶液30秒，移入5%草酸水溶液30秒，蒸馏水洗，然后染色。 用Heidenhain Susa混合液固定的组织，效果优于固定液 方法： ⑴新鲜组织固定于甲醛、酒精、Bouin液、Zenker液、Helly液、Susa液或其它固定液固定。 含骨及牙的组织，固定后经5%硝酸或三氯醋酸水溶液及10~15%EDTA水溶液（PBS）脱钙至用针刺能顺利刺入为止；修成适当的形状 ⑵常规脱水、透明、浸蜡，包埋，切片5~10微米。 脱钙骨组织脱水、透明（时间15~20分钟）及包埋，切片10~20微米 肝、淋巴结、脾等结缔组织较少的器官，酒精内脱水时间较短；疏松结缔组织较多的组织如皮肤，酒精脱水时间稍长，于95%酒精内将脂肪脱尽 ⑶切片贴片、烘干（70℃1~2小时，37℃12~24小时）。 ⑷切片经两次二甲苯脱蜡。 骨切片改用松节油两次脱蜡，经无水酒精后入1%火棉胶液处理（防脱片），经无水酒精至蒸馏水洗 ⑸经两次无水酒精将二甲苯洗去。 ⑹速经95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精至蒸馏水。 含汞固定液如Helly液、Zenker液等，至70%酒精时加少许碘酒脱汞至浅棕色为止，再经5%硫代硫酸钠水溶液去碘，水洗后染色。 ⑺蒸馏水洗去酒精。 ⑻苏木精液染细胞核5~10分钟，自来水洗去多余染料。 一般用Delafiled苏木精或Harris苏木精或Ehrlich苏木精。 Harris苏木精对软骨基质不易着色。 气管、喉、骨发生最好用Hansen苏木精。 骨组织经1%硫酸钠水溶液洗后用特殊苏木精染色8~17分钟，水洗。不用分色。 甲醛长期固定的组织，细胞核着色困难，需经自来水充分冲洗，再用碳酸锂饱和水溶液中和10分钟或更久，然后染色。 如用Susa液、甲醛酒精混合液或Bouin液固定，苏木精染色较好。 各种组织的着色不同。 ⑼用盐酸酒精（70%酒精 100毫升加盐酸0.5~1 毫升）分色数秒至十秒，将多余的苏木精脱去。 ⑽快速用70%酒精洗涤后入氨酒精（70%酒精100毫升加氨水0.5~1毫升）返蓝，或经自来水洗至蓝色。 ⑾快速经80%酒精、90%酒精和95%酒精洗去氨水并脱水。 ⑿入0.5~1%伊红（95%）酒精液染数秒至数分钟。(伊红水溶液染色经水洗并在低浓度酒精内容易褪色） ⒀95%酒精 分色两次数秒至1~2分钟。视组织而定。淋巴结等组织较多的组织，伊红染色时间长，分色稍短。 ⒁无水酒精脱水两次各1分钟。 ⒂二甲苯透明2~3次各2分钟。 ⒃将切片从染色缸内取出，用布擦干切片四周的液体，滴加中性树胶。 ⒄轻轻用尖镊子挟取比组织略大的盖玻片，以一角接触树胶，缓慢压下，用镊子秃端轻压（排出切片上的气泡）。擦干盖玻片四周的树胶。放在切片板或晾片板上，置37℃温箱烤24小时以上。 结果：细胞核蓝至深蓝色，细胞质、胶原纤维、肌纤维、嗜酸性颗粒淡粉红色或淡红色。红蓝对比鲜明。 若苏木精染色过深，分色不足，细胞质和纤维略带蓝色；苏木精染色过淡，细胞核带红色。对比不鲜明。 二、冰冻切片苏木精-伊红染色法 LEICA1900冰冻切片机部分故障及处理
切片组织参考温度（℃）
方法 ⑴火棉胶切片经水洗后直接染色。用玻玻皿作游离染色。 ⑵直径10~15厘米的大培养皿加各种试剂。 ⑶苏木精染色10~20分钟，水洗。 ⑷盐酸酒精分色，水至直蓝色（可加少量碳酸锂饷液或氨水） ⑸伊红水溶液染色1~5分钟，水洗。 ⑹逐级经70%、80%、90%、95%、无水酒精脱水，二甲苯 透明，中性树胶封片。 结果：同上 三、火棉胶切片苏木精-伊红染色法 ⑴火棉胶切片（脱水、透明、浸胶、包埋、硬化、切片）保存于70%酒精 ⑵火棉胶切片从70%酒精内取出，蒸馏水洗两 次。 ⑶苏木精染色，水洗。 ⑷伊红染色，水洗。 ⑸经各级酒精脱水至95%酒精。 ⑹入石炭酸二甲苯脱水透明。 ⑺入纯二甲苯两次并洗去残余的石炭酸。 ⑻取于载玻片，滴加树胶，加盖玻片封片。 结果：同上。 四、细胞爬片苏木精伊红染色法 ⑴对于贴壁生长的细胞，以胰蛋白酶消化，调整细胞浓度约1×105个/毫升，滴加于盖玻片上，置于六孔板中，培养适当时间，取出细胞爬片，用PBS洗涤3次。 ⑵95%酒精固定20分钟，PBS洗涤2次，每次1分钟。 ⑶苏木精液染核2~3分钟，自来水洗。 苏木精液：铵明矾溶于蒸馏水70毫升，加苏木精0.5克，加碘酸钠1克，蒸馏水5毫升，加甘油30毫升和冰醋酸2毫升，混匀，过滤备用。 ⑷镜检，如细胞核染得过深，用0.5~1%盐酸酒精分色数秒，自来水洗。 ⑸入0.5~!%伊红水溶液染1分钟，自来水洗。 ⑹吸干或自然晾干。 ⑺中性树胶封片。 *若细胞用4％多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木精染色12-15分钟，伊红5分钟即可。
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