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非洲猪瘟抗体检测试剂盒 使用说明书 联系call版号：1991-4747-194 介绍 非洲猪瘟（African Swine fever，简称：ASF）抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的非洲猪瘟抗体。 本试剂盒采用间接ELISA法，在酶标板条微孔上预包被纯化的ASF抗原。在试验中，加入稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有ASF病毒特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物；在微孔中加入TMB底物液，经酶催化形成蓝色产物，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。 组份
需自备的设备及试剂 1. 微量移液器： 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。 2. 一次性移液器吸头。 3. 量筒：500ml。 4. 96孔板酶标仪。 5. 蒸馏水或去离子水。 6. 洗瓶或洗板机。 样品制备 取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。 洗涤液的准备 浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。 样品的稀释 在血清稀释板中按1：100的体积比稀释待检血清。 注意：阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头，准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。 注意事项 1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。 2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。 3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。 4. TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。 5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。 6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。 7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。 8. 血清稀释板为一次性用品，不得重复使用；血清稀释板的最大容量为300μl/孔。 操作步骤 1. 取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性对照1孔，阳性对照2孔，取阴性及阳性对照各100μl分别加入反应孔中，轻轻振匀孔中样品（勿溢出）。 2. 盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育30分钟。 3. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上步骤重复4-6次，最后在干净吸水纸上拍干。 4. 每孔加酶标记物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。 5. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤4-6次, 方法同3。切记最后在干净吸水纸上拍干。 6. 每孔加显色液100µl，轻微震荡混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。 7. 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。 结果判定 用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。 试验成立的条件是： 阴性对照（N）OD值<0.2，同时阳性对照（P）OD值≥0.6； 计算方法： 样品OD值÷阳性对照OD均值 = S/P值 阴阳性判断： S/P<0.25判为阴性; S/P≥0.25判为阳性； 有效期 贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。 有效期： 12个月。 |
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