Masson三色染色法 选择固定液很重要 Ⅰ 固定液:甲醛升汞液 ⑴流水冲洗,入70%酒精,加碘液脱汞至酒精呈极浅的棕色,5%硫代硫酸钠(sodium hyposulfite)水溶液去碘,水洗 ⑵70%、80%、90%、95%、无水酒精脱水 ⑶二甲苯透明 ⑷浸蜡两次 ⑸石蜡包埋 ⑹切片8微米以下,贴片,烘干 ⑺切片经二甲苯脱蜡,经各级酒精下行至蒸馏水 ⑻1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟,蒸馏水洗去多余染料 地衣红液:80%酒精100毫升,地衣红(orcein)1克,盐酸(hydrochloric acid )1毫升 ⑼Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟,充分水洗 ⑽必要时用盐酸酒精分色,自来水洗至切片呈蓝色 ⑾丽春红品红液染色5~10分钟,用滤纸沾干 丽春红品红液:蒸馏水100毫升,依次溶解:丽春红(Ponceau S)0.8克,酸性品红(acid fuchsin)0.4克,冰醋酸(glacial acetic acid)1毫升 ⑿0.5%醋酸(acetic acid)水溶液洗30~60秒,蒸馏水略洗 ⒀1%磷钼酸(phosphomolybdic acid hydrate)水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色 ⒁1%醋酸水溶液洗30秒 ⒂2%亮绿液染色3~5分钟 亮绿液:蒸馏水98毫升,亮绿Y(Light green Y) 2克,冰醋酸2毫升 ⒃1%醋酸水溶液洗涤 ⒄95%酒精和无水酒精脱水各1分钟 ⒅二甲苯透明,中性树胶封片 结果:胶原纤维绿色;弹性纤维棕色或深棕色;肌纤维红色;纤维素红色;红细胞红色;细胞核蓝黑色 Ⅱ 固定液:Zenker液 ⑴流水冲洗,入70%酒精,加碘液脱汞至酒精呈极浅的棕色,5%硫代硫酸钠水溶液去碘,水洗 ⑵70%、80%、90%、95%、无水酒精脱水 ⑶二甲苯透明 ⑷浸蜡两次 ⑸石蜡包埋 ⑹切片8微米以下,贴片,烘干 ⑺切片经二甲苯脱蜡,经各级酒精下行至蒸馏水 ⑻1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟,蒸馏水洗去多余染料 地衣红液:80%酒精100毫升,地衣红1克,盐酸1毫升 ⑼Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟,充分水洗 ⑽必要时用盐酸酒精分色,自来水洗至切片呈蓝色 ⑾丽春红品红液染色5~10分钟,用滤纸沾干 丽春红品红液:蒸馏水100毫升,依次溶解:丽春红0.8克,酸性品红0.4克,冰醋酸1毫升 ⑿0.5%醋酸水溶液洗30~60秒,蒸馏水略洗 ⒀1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色 ⒁1%醋酸水溶液洗30秒 ⒂2%亮绿液染色3~5分钟 亮绿液:蒸馏水98毫升,亮绿Y2克,冰醋酸2毫升 ⒃1%醋酸水溶液洗涤 ⒄95%酒精和无水酒精脱水各1分钟 ⒅二甲苯透明,中性树胶封片 结果:胶原纤维绿色;弹性纤维棕色或深棕色;肌纤维红色;纤维素红色;红细胞红色;细胞核蓝黑色 Ⅲ 固定液:Bouin液 ⑴入70~80%酒精浸泡至基本无黄色(可加少量碳酸锂帮助脱去黄色) ⑵90%酒精 、95%酒精、无水酒精脱水 ⑶二甲苯透明 ⑷浸蜡,包埋,切片小于8微米,粘片,烘干 ⑸切片经二甲苯脱蜡,经各级酒精下行至蒸馏水 ⑹1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟,蒸馏水洗去多余染料 地衣红液:80%酒精100毫升,地衣红1克,盐酸1毫升 ⑺Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟,充分水洗 ⑻必要时用盐酸酒精分色,自来水洗至切片呈蓝色 ⑼丽春红品红液染色5~10分钟,用滤纸沾干 丽春红品红液:蒸馏水100毫升,依次溶解:丽春红0.8克,酸性品红0.4克,冰醋酸1毫升 ⑽0.5%醋酸水溶液洗30~60秒,蒸馏水略洗 ⑾1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色 ⑿1%醋酸水溶液洗30秒 ⒀2%亮绿液染色3~5分钟 亮绿液:蒸馏水98毫升,亮绿Y2克,冰醋酸2毫升 ⒁1%醋酸水溶液洗涤 ⒂95%酒精和无水酒精脱水各1分钟 ⒃二甲苯透明,中性树胶封片 结果:胶原纤维绿色;弹性纤维棕色或深棕色;肌纤维红色;纤维素红色;红细胞红色;细胞核蓝黑色 Ⅳ 固定液:甲醛(水或生理盐水或磷酸盐缓冲液)、多聚甲醛 染色前必须用升汞(mercuric chloride)液或苦味酸(picric acid)酒精液媒染。 ⑴组织块常规脱水,石蜡包埋,切片不超过8微米 ⑵切片经二甲苯脱蜡,经各级酒精下行至蒸馏水 ⑶在3%升汞液或苦味酸酒精溶液媒染1小时 ⑷1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟,蒸馏水洗去多余染料 地衣红液:80%酒精100毫升,地衣红1克,盐酸1毫升 ⑸Weigert苏木精或明矾苏木精(alum hematoxylin)染细胞核10~15分钟,充分水洗 ⑹必要时用盐酸酒精分色,自来水洗至切片呈蓝色 ⑺丽春红品红液染色5~10分钟,用滤纸沾干 丽春红品红液:蒸馏水100毫升,依次溶解:丽春红0.8克,酸性品红0.4克,冰醋酸1毫升 ⑻0.5%醋酸水溶液洗30~60秒,蒸馏水略洗 ⑼1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色 ⑽1%醋酸水溶液洗30秒 ⑾2%亮绿液染色3~5分钟 亮绿液:蒸馏水98毫升,亮绿Y2克,冰醋酸2毫升 ⑿1%醋酸水溶液洗涤 ⒀95%酒精和无水酒精脱水各1分钟 ⒁二甲苯透明,中性树胶封片 结果:胶原纤维绿色;弹性纤维棕色或深棕色;肌纤维红色;纤维素红色;红细胞红色;细胞核蓝黑色 可用地衣红染弹性纤维。分色时镜检。醋酸分色不要过度。亮绿可用苯胺蓝代替 附:Weigert铁苏木精染色法 两液分别配制,用时混合。只能用几次。 A液:1%苏木精(95%酒精)溶液 10毫升 B液:29%氯化铁(ferric trichloride)水溶液4毫升,盐酸(25%)1毫升,蒸馏水95毫升 (三氯化铁1.16克,蒸馏水98毫升,盐酸1毫升) 使用时将A、B两液等量混合(各50毫升),染色数分钟。 附:明矾苏木精 1 Hansen铬明矾苏木精 4%铬明矾水溶液:铬明矾(chromic potassium sulfate)10克溶于蒸馏水250毫升,煮沸至溶液呈绿色 苏木精(haematoxylin)1克溶于热蒸馏水15毫升 10%硫酸(2N)水溶液:浓硫酸(sulfuric acid)10毫升,蒸馏水90毫升 2.76%重铬酸钾水溶液:重铬酸钾(potassium dichromate )0.552克溶于蒸馏水20毫升 充分振荡混合; 再加10%硫酸(2N)5毫升 苏木精水溶液倒入铬明矾液,充分振荡混合,加入硫酸液5毫升 倒入重铬酸钾液20毫升,煮沸1~2分钟。待溶液冷却后过滤。 此液保存性好,不会过染,也不易褐色 染30秒至2分钟,可使细胞核呈蓝黑色;若硫酸减至1~3毫升,可使细胞浆着色,也能染神经元内的尼氏体(虎斑) 2 Mayer酸性明矾苏木精 苏木精1克,蒸馏水100毫升;碘酸钠(sodium iodate )0.2克,钾明矾(aluminium potassium sulfate)50克。加温溶解,溶液呈蓝紫色。 加水合氯醛(chloral hydrate)50克,枸橼酸(citric acid)1克,溶液呈红紫色。能长久保存。陈液着色力较强。可用2%钾明矾水溶液稀释,染后流水洗至细胞核至深蓝色。 切片染色4~6分钟,小块组织染24小时。 3 Mayer钾明矾苏木红 苏木红(haematein)1克溶于95%酒精50毫升,稍加温溶解。加5%钾明矾(aluminium potassium sulfate)水溶液100毫升,最后加樟脑(camphor)少许防腐。 4 Delafield苏木精 苏木精4克溶于无水酒精25毫升,倒入10%铵明矾(aluminum ammonium sulfate)水溶液400毫升,置有光处3~4天,过滤,加甘油(glycerin)和甲醇(methanol)各100毫升。数日后过滤。能长久使用。 此液对细胞核和嗜碱性物质染色效果很好。着色力强。 一般染色数分钟;也可用蒸馏水稀释50~100倍,染色4~24小时。 5 Ehrlich酸性苏木精 苏木精2克溶于95%酒精100毫升,加蒸馏水及纯甘油各100毫升、钾明矾3克、冰醋酸10毫升。混合后溶液呈红色。用纱布封闭瓶盖,2周后成熟,溶液呈暗红紫色。 切片染数分钟。 此液适合于块染,需用蒸馏水或50%酒精稀释4~5倍,小块组织染1~2天。 6 Harris苏木精 10%苏木精(95%或无水酒精)溶液10毫升与10%钾明矾水溶液(加热溶解)200毫升混合于1000毫升烧瓶内。继续加热煮沸1分钟,停火,缓慢加氧化汞(mercuric oxide)0.5克,再加热煮沸1分钟。迅速将三角烧瓶放入冷水中冷却。可加冰醋酸5~10毫升,加强细胞核的着色能力。 切片染色约3~10分钟。 不适合整块组织染色。 |
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