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甲醇和乙腈在反相液相色谱中作用的介绍 反相流动相通常包含水和极性较小的有机溶剂（有机改性剂），以及诸如缓冲液，酸或碱之类的添加剂。在反相状态下，流动相的水相组分的洗脱强度较弱，而有机相的洗脱强度较高。因此可以调节水和有机物的相对比例，以控制分析物的保留。多种有机溶剂适合用作反相液相色谱中的有机改性剂，尽管在实践中，常规仅使用了少数几种。在选择有机溶剂时，必须考虑诸如与水的混溶性，极性，紫外线阻隔性，粘度和安全性等特性。每种有机改性剂都有其优缺点，应在使用前加以考虑。例如，四氢呋喃（THF）和异丙醇（IPA）都可以使用，因为它们均提供了高洗脱强度。但是，由于IPA的高粘度（导致较低的性能和较高的背压），因此IPA的使用受到限制，而THF会降低泵的密封性以及PEEK管路和配件，并需要使用稳定剂（例如BHT）来防止过氧化物的形成。丙酮是一种廉价的溶剂，多年来，乙腈和甲醇已成为许多反相应用中选择的两种有机改性剂。两种溶剂都可以与水完全混溶，并且与常见的流动相添加剂和缓冲液兼容（尽管在有机成分较高的情况下使用缓冲盐时应格外小心）。两种溶剂都有其优点和缺点，最终改性剂的选择通常取决于应用。例如，乙腈的成本明显高于甲醇，而甲醇的毒性也较小。但是，乙腈的紫外截止值要比甲醇低（190 nm和205 nm），这使其更适合用于需要低UV检测波长的应用中（但是请注意，对于LC，使用HPLC级或更好的溶剂很重要分析）。此外，乙腈/水混合物的粘度低于甲醇/水混合物，因此在LC色谱柱上产生的背压要低得多。人们通常认为这种较低的背压是有利的，因为它对LC系统组件和色谱柱施加的压力较小，并提供了增加流速和减少运行时间的余地。 甲醇和乙腈在反相液相色谱中作用的静电强度 对于反相色谱，乙腈比甲醇具有更高的洗脱强度，因此，对于有机物与水等比例的样品，保留的分析物保留时间较短。在此示例中，对于这些中性分析物的分离，使用甲醇/水可获得大约1.7倍的保留时间。原则上，可以增加B中甲醇的比例，以获得分离（即与乙腈/水混合物的溶出强度匹配）。确实，在最近的2008/9年度乙腈短缺期间，一些实验室试图在流动相中用甲醇代替乙腈。对于某些应用程序，此方法可能会成功。尽管应谨慎行事，因为选择性和洗脱顺序可能会发生较大变化。 甲醇和乙腈在反相液相色谱中作用的选择性 乙腈和甲醇可用性最有用的方面之一是它们具有不同的溶剂特性。甲醇是质子惰性的溶剂，而乙腈是质子惰性的溶剂，并具有较强的偶极矩。这意味着在流动相中使用的有机改性剂可以对色谱选择性产生强大的影响。因此，改变流动相的有机成分可以成为功能强大的方法开发工具。使用甲醇和乙腈作为有机改性剂的相同梯度分离过程。在本例中，使用乙腈时会观察到几种共洗脱。当使用甲醇时，会产生不同的选择性，并且所有样品组分都可以完全分离。对于某些分析物，相对保留的变化很大，并且观察到洗脱顺序完全颠倒。因此，强烈建议在方法开发过程中同时评估乙腈和甲醇，以确定最合适的溶剂并帮助优化分离。由于甲醇和乙腈可以完全互溶，因此也可以将它们混合以微调分离。碱性分析物的梯度分离示例，其中作为有机改性剂的甲醇或乙腈均无法完全分离。通过将两种溶剂与作为三元混合物的水共混，可以获得中间选择性并分离所有七个组分。 甲醇和乙腈在反相液相色谱中作用的结论 乙腈和甲醇在反相液相色谱中用作有机改性剂均有利有弊，最佳选择取决于应用。这两种溶剂最重要的方面可能是它们彼此之间提供了完全不同的选择性。因此，在开发新的反相方法时，强烈建议对甲醇和乙腈进行研究是一种有价值的方法。 |
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