|
细胞周期同步化之DNA合成双阻断法 1、TdR简介：胸腺嘧啶核苷，是DNA的特异前体，能被S期细胞摄入，而掺进DNA中。通常使用的是3H或者14C标记的TdR。适当浓度的TdR就可以像其它四种脱氧核苷酸一样作为底物参与DNA合成，所以3H-TdR能标记S期的细胞，其中高浓度TdR对S期细胞的毒性较小，因此常用TdR双阻断法诱导细胞同步化。 2、DNA合成双阻断法的原理：利用TdR可以抑制DNA合成，而不影响其他时期细胞的运转，最终可将细胞群阻断在S期或G/S交界处，使细胞同步化。  3、DNA合成双阻断法小结： 第一次：在细胞处于对数生长期的培养基中加入过量TdR，S期细胞被抑制，其它细胞继续运转，最后停在G1/S交界处。第一次阻断持续时间：t≥G2+M+G1 第二次：移去TdR，洗涤细胞并加入新鲜培养液、细胞又开始分裂，当释放时间大于TS时，所有细胞均脱离S期，再次加入过量TdR，细胞继续运转至G1/S交界处，被过量TdR抑制而停止。 第一次阻断之后洗脱TDR到第二次加入TdR要持续的时间为t，则它必须满足： S<t<g2+m+g1< p=""> 4、高考链接：2012上海下表数据为实验测得体外培养某种细胞的细胞周期各阶段时间(单位：小时)  若在上述细胞的培养液中加入过量的DNA合成抑制剂，处于___S___期的细胞立刻被抑制，再培养__15___小时，则其余细胞都将被抑制在G1，S期交界处；去除抑制剂，更换新鲜培养液，细胞将继续沿细胞周期运行，在所有细胞达到__G1___期终点，再加入DNA合成抑制剂，则全部细胞都被阻断在G1／S期交界处，实现细胞周期同步化。 5、模拟试题：某连续分裂的细胞周期总时长为 L。用 TdR（DNA 合成抑制剂）双阻断法可使细胞周期同步化，在培养连续分裂的细胞的培养基中加入适量的TdR，继续培养一个细胞周期的时长，洗脱 TdR 并在普通培养基中继续培养适宜时间后，再次加入 TdR 培养充足时间后洗脱 TdR，即可使细胞周期同步化。下图表示用 TdR（DNA 合成抑制剂）双阻断法使细胞周期同步化，其中 t1～t8 表示时间点。 下列叙述正确的是  A．t4－t5 的时长应大于 S 期，但必须小于 G 1期＋G 2期 B．若 t5－t8 的时长等于 G 1＋G2 ＋M－S 期 ，且 t7－t8 的时长大于 G1 期 ，则 t6 和 t7 时，核 DNA含量为 4N 的细胞所占的比例相等 C．若改用秋水仙素代替 TdR 处理，且取 t2－t3 时的细胞用碱性染料染色，则 t3时能观察到细胞核的细胞数等于 t2 时 D．若要进行动物细胞有丝分裂的观察活动，选择 t8 时的细胞比选择 t1 时的细胞，通常可获得更好的效果 答案：B A答案解析：t4--t5持续时间：s<t<g2+m+g1< p=""> B答案分析：若 t5－t8 的时长等于 G 1＋G2 ＋M－S 期 ，且 t7－t8 的时长大于 G1 期 ， t6 和 t7时的细胞都是处于G2或M期，则所有的细胞核 DNA含量为 4N ，即比例为100%，B正确。 C答案分析：若改用秋水仙素代替 TdR 处理，会影响细胞纺锤体的形成，会停留在分裂中期见链接 https://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzAwNDEyNzMwOQ==&mid=2457573561&idx=1&sn=f591b5ebc025aba7b04793b1dc6a0adb&chksm=8cbf979bbbc81e8d55f32fe054ed82af14168f381a3403f624dfb0ce797ace3771f0a0792814&token=79727267&lang=zh_CN#rd王亚民，公众号：生物学教学浙江高考——细胞周期检测点所以取 t2－t3 时的细胞用碱性染料染色，t3时分裂期要多，能观察到细胞核的细胞数可能少于 t2 时，C错误。 D答案分析：因为t8 时的细胞都处于G1/S交界处 ，如要进行动物细胞有丝分裂的观察活动，需要分裂期的细胞，t8 时没有分裂期细胞，而 t1 时有分裂期的细胞，获得的效果好，D错误。 |
|
|
