| 暨南大学硕士学位论文 I 摘要 目的： 在乳酸工程菌（Lactococcus lactic NZ9700） 中表达人酸性成纤维细胞生长因子（acidic fibroblast growth factor, aFGF）， 制成活菌制剂， 并研究该制剂对葡聚糖硫酸钠（DSS） 诱导的小鼠溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC） 的治疗作用。 方法： 构建乳酸菌食品级的表达载体pGMN4- USP45-LEISS- aFGF14-154， 利用α-半乳糖苷酶基因筛选出重组子。 MTT法检测aFGF14-154蛋白对Balb/c 3T3细胞促增殖活性。 制成活菌制剂分高、 中、 低剂量， 通过比较小鼠的毛色、 体重、 便血、 结肠长度、 病变组织的髓过氧化物酶（MPO） 活性， 以及观察结肠组织病理形态学变化， 验证其对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的预防治疗效果。 结果： 成功构建了乳酸菌食品级表达载体 pGMN4- USP45-LEISS- aFGF14-154， 电转至乳酸菌 NZ9700 中， 在乳酸链球菌素的自诱导下， 可持续表达 aFGF， 产量为 50μg/ml， 在体外25~200ng/ml 的浓度范围内， aFGF14-154蛋白具有促增殖活性， 高剂量活菌制剂对溃疡性结肠炎模型具有很好的治疗效果， 表现为改善小鼠的一般情况和溃疡导致的结肠缩短， 促进组织修复， 保持结肠结构的完整性， 并下调 MPO 的活性。 结论： 构建的乳酸菌食品级表达系统能够很好地表达 aFGF14-154， 连接 USP45分泌信号肽的载体能够分泌表达 aFGF； 连接 LEISSTDCA 短肽明显增加分泌量。 aFGF14-154在体外具有促增殖活性， aFGF14-154乳酸菌活菌制剂对 DSS 诱导的小鼠溃疡性结肠炎有明显的改善作用。 关键词： 乳酸菌； 人酸性成纤维细胞生长因子； 溃疡性结肠炎 |
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