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目的：观察活血化瘀中药对子宫肌瘤Wnt信号转导通路抑制因子表达的影响，探究活血化瘀中药治疗子宫肌瘤是否是通过Wnt抑制因子而介导Wnt信号转导通路的调控，从而证实Wnt信号转导通路是可能是药物治疗子宫肌瘤的新靶点。 2方法：采用胶原酶1消化法无菌取得子宫肌瘤细胞/肌细胞并进行传代。分别给予不同浓度的活血化瘀中药处理，CCK8法测定细胞生长抑制率；荧光定量RT-PCR法检测子宫肌瘤细胞Wnt信号转导通路的抑制因子SFRP1、WIF1mRNA表达以及Wnt信号转导通路的关键基因β-cateninmRNA表达。免疫细胞化学Westernblot法检测SFRP1、WIF1、β-catenin蛋白表达变化。全基因组芯片法筛选药物作用前后人子宫肌瘤基因谱表达的变化。 3结果：①原代培养的子宫肌瘤细胞呈梭形或者椭圆形，呈束的平滑肌细胞平行排列，部分区域可见典型的峰谷样生长，免疫组化鉴定结果，a-actin染色阳性。②不同浓度的活血化瘀中药作用于子宫肌瘤细胞24、48、72小时后，对子宫肌瘤细胞表现出明显的增殖抑制效应，其作用星剂量和时间依赖性。⑨细胞培养第二天加药，加药48h后收集细胞进行RT-PCR，Westenblot检测分析。结果显示子宫肌瘤与正常子宫肌层均存在SFRP1、WIF1和β-catenin基因及蛋白表达。人子宫肌瘤细胞SFRP1、β-cateninmRNA含量明显高于于人正常子宫肌层细胞，活血化瘀中药干预子宫肌瘤细胞48h后，SFRP1、β-cateninmRNA表达均下调。人子宫肌瘤细胞WIF1mRNA含量明显低于于人正常子宫肌层细胞，活血化瘀中药干预子宫肌瘤细胞48h后，WIF1mRNA表达均上调。人子宫肌瘤细胞SFRP1、β-catenin蛋白含量明显高于人正常子宫肌层细胞(p<0.05)，活血化瘀中药干预子宫肌瘤细胞48h后，SFRP1、β-catenin蛋白表达均下调(p<0.05)。人子宫肌瘤细胞WIF1蛋白含量明显低于于人正常子宫肌层细胞(p<0.05)，活血化瘀中药干预子宫肌瘤细胞48h后，WIF1蛋白表达均上调(p<0.05)。④全基因谱筛选证明活血化瘀中药治疗子宫肌瘤在生物学进程方面主要影响影响信号转导，特别是肿瘤相关的信号转导。差异基因中包括Wnt信号转导通路中的其它6个基因。子宫肌瘤细胞与正常子宫肌细胞相比，有5个基因下调，一个基因上调。其中DKK3的在子宫肌瘤和正常子宫肌层细胞中表达的差异最大。活血化瘀中药可干预这6个差异基因的表达。 4结论：①人子宫肌瘤细胞上存在Wnt信号转导通路，Wnt信号通路可能是子宫肌瘤的重要发病机制之一。②活血化瘀中药可抑制体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖。随着药物剂量的增加和用药时间的延长，对子宫肌瘤细胞的增殖作用增强，呈剂量和时间依赖性。③活血化瘀中药通过影响Wnt抑制因子SFRP1、WIF1、β-catenin的表达抑制子宫肌瘤细胞的增生。④影响Wnt信号转导通路的抑制因子的表达是可能活血化瘀中药治疗子宫肌瘤的重要机制之一 |
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