【原】siRNA沉默效果分析方法

siRNA 转染细胞后，siRNA 在细胞内一系列酶的作用下形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)，识别并切割靶基因mRNA，诱发宿主细胞针对这些mRNA的降解反应， 从而抑制了细胞内目的基因蛋白的表达，一般可从两个方面进行检测。

mRNA 水平 - QPCR检测：

siRNA的作用机理在于其引起靶基因mRNA的降解，因此mRNA的降解水平是siRNA 沉默效率的直接证明。一般在siRNA转染后24小时后即可检测到靶mRNA水平的降低，可采用细胞总RNA提取，全长cDNA合成，荧光定量实验即可检测到mRNA 的敲除效率。

蛋白水平 - WB检测：

siRNA引起靶基因mRNA的降解，从而影响了靶蛋白的表达。但蛋白水平检测时间受细胞内目的蛋白表达量、稳定性、半衰期、甚至其他调控等因素的影响，蛋白质水平下降的幅度与mRNA水平下降不一定成线性正比关系。一般在转染后48后开始WB检测，72，96 小时，甚至更长时间之后多点采样。