【原】IPS细胞培养过程

1. 首先必须先选择要表达的重新设定关键因子，根据文献发表的有Yamanaka 及Thomson两种组合。除了这两种组合外，有许多的文献报导与重新设定细胞相关的其他重要基因。

2. 接着选择基因传送的方式，目前最常被使用的为反转录病毒(retrovirus)、慢病毒(lentivirus) 、仙台病毒(sendai virus)及质粒载体(plasmid vectors)四种基因载体系统。

3. 决定要重新设定的细胞种类，一般而言为容易取得的体细胞，如：纤维母细胞(fibroblast)。不同种类的细胞所能重新设定生成iPS的效率也有所差异，例如：重新设定胃上皮细胞(gastric epithelial cells)的iPS生成率为1-3%，但是B细胞只有0.01-0.1%的生成率。

4. 建立测试关键因子表达效率的系统，例如RT-PCR及Western blotting。

5. 测试培养条件，不同的细胞种类在经过重新设定转化成干细胞的过程中，所适合的培养条件都不尽相同。此阶段是生成iPS最关键的步骤。

6. 当培养环境适合时，约莫2-3周后细胞会产生型态上的改变，渐渐形成聚落(colonies)。随着培养天数增加，聚落生长会越来越明显，越趋接近胚胎干细胞的生长特性，如下图：

1. 最后，当成功获得并放大培养iPS聚落后，需进行包括基因表现图谱分析以及功能性确认，证实iPS的特性与胚胎干细胞相同。将胚胎干细胞注射入小鼠皮下时会形成肿瘤，此种肿瘤以病理切片观察会同时具有三个胚层的特性，称为畸胎瘤(teratoma)。此为胚胎干细胞的独有的特性，而重新设定完全的iPS也会具有此种特性。总结以上可以得知，iPS的生成是一个非常耗时的过程，一般而言约需3-4周。除此之外，目前文献统计，iPS平均的生成率约仅0.01%-0.1%。因此如何节省iPS生成的时间以及提高生成效率是研究上需要突破的关卡。