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293细胞系是从原代胚胎人类肾脏中建立的永久性细胞系人类腺病毒5型DNA。腺病毒E1区（E1a和E1b）编码的基因是在这些细胞中表达，并参与病毒启动子的反式激活，使这些细胞产生高水平的蛋白质。E1还补充了重组腺病毒载体中的E1缺失，允许病毒复制。我们的293/Cas9细胞系稳定表达Cas9和嘌呤霉素抗性基因。利用逆转录病毒将Cas9和嘌呤霉素抗性基因导入亲代293细胞。
图：293/Cas9细胞系表达Cas9蛋白。293个细胞或293/Cas9细胞用RIPA缓冲液，并使用Cell Biolab的Cas9 ELISA试剂盒（Cat#PRB-5079）检测Cas9蛋白水平。 293细胞系培养方法： 从冷冻细胞建立293/Cas9培养基： 1.将10毫升完整的DMEM生长培养基放入50毫升锥形管中。解冻冷冻的食物在37°C水浴中轻轻搅拌，在1-2分钟内冷冻细胞。净化空气用70%（v/v）乙醇擦拭冷冻瓶表面。 2.将解冻的细胞悬浮液转移到含有10mL生长培养基的锥形管中。 3.在室温下以1000 rpm的转速离心5分钟，收集细胞。移除通过抽吸培养基。 4.轻轻移液，将细胞重新放入锥形管中的15毫升新鲜生长培养基中然后倒下。 5.将15毫升细胞悬浮液转移到T-75组织培养瓶中。将电池置于37°C的环境中培养箱中的二氧化碳浓度为5%。 6.每天监测细胞密度。细胞应在培养物达到95%汇合时传代。 1.CBA-100：细胞选择™ 24孔细胞迁移试验（波顿室试验，比色法） 2.CBA-106：细胞选择™ 96孔细胞迁移试验（Boyden小室试验，荧光法） 3.CBA-110：细胞选择™ 24孔细胞侵袭试验（波顿室试验，比色法） 4.CBA-120：细胞选择™ 24孔伤口愈合试验 |
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