 介绍 周围神经性疼痛是一种严重的慢性疼痛状态，可能由周围神经系统的感觉神经的创伤引起。保留神经损伤(SNI)模型诱发神经性疼痛的症状，如机械性异位痛，即由触觉刺激引起的疼痛，通常不会引起疼痛反应。 SNI小鼠模型包括结扎坐骨神经三个分支中的两个（胫神经和腓总神经），而腓肠神经保持完整的。病变导致爪子外侧区明显的过敏，这是由保留的腓肠神经支配的。 SNI模型的优点是反应的稳健性，而且它不需要专业的显微外科技能。机械性疼痛反应的阈值是通过测试vonFrey纤维增加的弯曲力来确定的，弯曲力反复压在爪的外侧区域。积极的疼痛反应被定义为由纤维引起的突然的爪子退缩、退缩和/或舔爪子。五次重复刺激中有三次的阳性反应被定义为疼痛阈值。 大鼠和小鼠操作相似，下面以小鼠举例，为大家参考。 protocol 一、von Frey术前的基线测量值 详见第五部分 二、麻醉和准备 1.麻醉动物（腹腔注射100mg/kg氯胺酮和15mg/kg甲苯噻嗪的混合物）。 2.将动物放在一个安静的地方，直到完全麻醉（例如用纸巾覆盖）。 3.用镊子夹住尾巴的尖端和爪子来检查反射。在继续行动之前，确保动物没有反应。 4.皮下注射（后肩区域）0.5ml等渗生理盐水和抗生素，如氨苄西林（以避免脱水和防止感染，尽管这是一个较小的外科手术）。 5.使用电动剃须刀，将手术野从膝盖以下稍微向下刮到臀部（对于右撇子患者，建议使用左后肢）。 6.用棉絮芽在眼睛上涂抹眼药膏。 7.将动物放在其右侧，并将左后肢放在一个小平台上，以保持其升高。用胶带固定住腿部。 8.从手术部位交替用乙醇和碘碘碱消毒手术野。 三、手术操作 1.用左手的拇指找到膝盖，用手术刀制作一个应用程序。膝关节近端纵向1cm切口。 2.用一把无菌剪刀的尖端进行钝性分离皮肤 3.在靠近大腿骨（股骨）的清晰可见的血管附近，通过钝性剥离来分离肌肉层。如果做得正确，肌肉层将很容易分离，没有任何出血，显示出肌肉正下方的坐骨神经。如果发生出血，例如通过损伤靠近膝盖的血管，使用无菌棉絮芽或凝视片来吸收血液。压迫出血点，直到出血停止。 4.将小鼠置于立体显微镜下，用一对无菌镊子小心地分离肌肉(nr.2)观察坐骨神经，也可以使用牵开器。 5.确定坐骨神经分支的区域。腓肠神经是三条分支中最小的一条，在左腿上向右分支。 6.在其他两个仍然平行运行的分支（胫神经和腓总神经）周围缝合（6-0缝合），非常小心不要接触腓骨分支。这是一个关键的步骤，因为腓肠神经必须保持完全完整。 7.做一个紧密的手术结。如果第一个结是紧的，将观察到肢体的收缩。 8.用一对镊子抓住缝合线下面的神经（nr.5）。用一把小剪刀切断镊子上下的神经。首先在镊子上方切开，避免了拉动神经。 9.用一把微剪刀剪掉缝合线的末端，轻轻地闭合肌肉层。在伤口上加入一滴利多卡因，用手术结缝合。 四、术后护理 1.检查眼药膏是否仍然充足。 2.将老鼠放在一个干净的笼子里，放在纸巾下，保持舒适的姿势。如果房间很冷，在笼子的一部分下面放一个热垫（只在笼子的一部分下面，因为如果动物想到较冷的区域）。 3.确保容易获得的水和食物。 五、vonFrey测试（基线，从术后第一天开始） 1.术前两天和一天，将小鼠置于红色的塑料圆筒中，放置在金属丝网桌上。在测试前，在钢瓶中习惯15min。圆柱体的红色可以帮助老鼠快速放松，因为它们看不到彼此，并且在一个较暗的区域。 2.验证老鼠平静和应用vonFrey外侧的爪子：从0.02g丝开始，首先应用力左爪五次总共30秒（大约2秒/刺激）和测量每个应用程序后鼠标的反应。用同样的纤维和其他老鼠的左爪重复，然后用第一只老鼠的右爪重新开始，然后继续到下一根纤维，例如 · Mouse 1: left paw 5 times with filament 0.02 g · Mouse 2: left paw 5 times with filament 0.02 g etc. · Mouse 1: right paw 5 times with filament 0.02 g · Mouse 2: right paw 5 times with filament 0.02 g etc. · Mouse 1: left paw 5 times with filament 0.04 g · Mouse 2: left paw 5 times with filament 0.04 g etc. 3.五分之三的刺激物的反应被认为是一种阳性反应。高于阈值的纤维可用于验证阈值水平。反应=突然的爪子退缩，突然的退缩，突然的舔爪子。 六、结果呈现
七、关键步骤 为了研究胫骨神经和腓总神经损伤后完整的腓肠神经的病理改变，应避免对腓肠神经损伤。腓肠神经的附带损伤可能导致瘫痪，因此可以可视化为手术后肢的拖动。只有爪子的外侧受到剩余的腓肠神经的支配，因此，只有这个区域会发生神经病变。测试其他由横断神经支配的区域，可以强烈地偏向于对改变的机械阈值的评估。 参考文献：The Spared Nerve Injury (SNI) Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice. |
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