一种治疗肺鳞状细胞癌及癌性疼痛的植物原生粉.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710828426.X (22)申请日 2017.09.14 (71)申请人 湖南晓林生物科技发展有限公司 地址 410600 湖南省长沙市宁乡县玉潭镇 街道通益社区御景云天B栋403号 (72)发明人 谢丹 (74)专利代理机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 44205 代理人 许飞 薛建强 (51)Int.Cl. A61K 36/15(2006.01) A61K 9/14(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 29/00(2006.01。

2、) A61P 25/00(2006.01) A61K 129/00(2006.01) (54)发明名称 一种治疗肺鳞状细胞癌及癌性疼痛的植物 原生粉 (57)摘要 本发明公开了一种治疗肺鳞状细胞癌及癌 性疼痛的植物原生粉。 发明人经多年的攻克首次 发现， 确证马尾松老树皮原生粉可锁定并能选择 性地治疗癌性疼痛， 马尾松老树皮原生粉对肺鳞 状细胞癌有效率高达99.999.99甚至100， 癌性疼痛抑制率高达88.599， 可以有效减少 癌性疼痛。 可能的作用机制是通过抑制细胞增 殖、 诱导细胞凋亡和抑制血管生成而发挥抗癌性 疼痛作用。 对治疗肺鳞状细胞癌及癌性疼痛有较 强的靶向性， 并不产生耐药。

3、性， 与传统化疗药无 交叉耐药。 马尾松老树皮原生粉安全无毒， 有望 成为一种新的治疗肺鳞状细胞癌及癌性疼痛的 植物新药。 权利要求书1页 说明书9页 附图10页 CN 107616987 A 2018.01.23 CN 107616987 A 1.马尾松老树皮原生粉在制备治疗肺鳞状细胞癌药物中的应用。 2.马尾松老树皮原生粉在制备治疗癌性疼痛药物中的应用。 3.根据权利要求1或2所述的应用， 其特征在于： 马尾松老树皮的生长年限不少于5年。 4.根据权利要求1或2所述的应用， 其特征在于： 马尾松老树皮的生长年限不少于10年。 5.根据权利要求1或2所述的应用， 其特征在于： 马尾松老树皮原。

4、生粉的粒径为300 500目。 6.根据权利要求1或2所述的应用， 其特征在于： 马尾松老树皮原生粉的制备方法如下： 1)取马尾松老树皮， 筛选除杂， 55以下干燥； 2)将干燥后的马尾松老树皮原生粉碎至300500目。 7.根据权利要求1或2所述的应用， 其特征在于： 药物为口服制剂。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于： 口服制剂选自片剂、 颗粒剂、 胶囊剂。 9.一种治疗肺鳞状细胞癌的药物， 其特征在于： 其起效成分为马尾松老树皮粉。 10.根据权利要求9所述的药物， 其特征在于： 药物为口服制剂。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107616987 A 2 一种治疗肺。

5、鳞状细胞癌及癌性疼痛的植物原生粉 技术领域 0001 本发明涉及医药领域， 具体涉及一种植物原生粉和应用， 特别涉及马尾松老树皮 原生粉和应用。 背景技术 0002 癌症对人类的威胁日益增大， 成为危及人类健康与生命的 “头号杀手” 。 征服癌症 已成为全人类面临的一项迫在眉睫的任务， 各国都把它作为重要课题投入巨资进行攻关。 目前， 由于手术治疗及放化治疗均有一定的局限性， 而化学药品的毒副作用又不断出现， 国 际科学界开始把目光转向更为天然植物提取物治疗癌症成为科学家们的研究热点。 0003 大量的实验证明， 手术只能切除可见癌组织对隐藏血液、 体液、 组织及淋巴的癌细 胞手术则无能为力；。

6、 其次， 手术过程中哪怕掉下一个癌细胞落在身体的任何部位会开始生 长并扩散转移； 手术是一种较大创伤， 术后体内残留的癌细胞易在人体免疫力低下时复发。 0004 鳞状细胞癌(SCC)占原发性肺癌的4051。 是来源于支气管上皮的一种恶性 上皮性肿瘤， 可表现角化和/或细胞间桥特征。 包括梭形细胞癌是最常见的类型， 约占原发 性肺癌的40-50.1.90以上的肺鳞状细胞， 肺鳞癌的治疗有说法说肺鳞癌第一个周期 化疗较敏感治疗作用可达25， 第二个周期化疗可达15， 第三个周期作用为5， 三个周 期以后作用基本为零， 因此认为肺鳞癌病情与其它肺癌类型一样都是很复杂的， 虽然肺鳞 癌出现远处转移的时。

7、间较晚， 但是远处转移如肝转移也是它的固有属性， 肝转移也是肺鳞 癌常见的转移部位， 脑转移是肺鳞癌常见的转移部位， 一般来说脑转移患者病情都比较危 险， 治疗难度较大， 如何获得控制病情扩散才是最好的治疗办法。 因此， 肺鳞癌脑转的病情 进展较快。 0005 肉眼观察： 形态多不规则质地较硬无包膜， 与周围组织无界限剖面实质性呈灰白 色， 中心常有坏死区有明显炎症自觉疼痛。 如发生在皮肤与粘膜交界处， 固潮湿与摩擦更易 出血、 发展更快、 可形成菜花状、 破坏性大、 有明显疼痛、 易转移及预后不良等。 0006 癌性疼痛治疗： 癌性疼痛一般以药物治疗为主， 手术治疗往往需要结合患者的总 体身。

8、体状况及生存期考虑。 明确患者的疼痛原因并给予治疗后， 必须对镇痛效果及疼痛缓 解程度予以评价， 以便制定今后治疗方案及用药剂量。 0007 一、 癌性疼痛的药物治疗原则： 0008 (1)尽量口服给药， 便于长期用药， 可以减少依赖性和成瘾性。 0009 (2)有规律按时给药， 而不是出现疼痛时再给药。 0010 (3)按阶梯给药， 根据WHO推荐的癌性疼痛 “三阶梯疗法” 。 0011 (4)用药应该个体化。 0012 (5)注意使用抗焦虑、 抗抑郁和激素等辅助药物， 可提高镇痛治疗效果。 0013 二、 癌性疼痛药物治疗的 “三阶梯疗法” 0014 (1)第一阶梯非阿片类镇痛药。 用于轻。

9、度癌性疼痛患者， 主要药物有阿司匹林、 对 乙酰氨基酚等， 可酌情应用辅助药物。 说 明 书 1/9 页 3 CN 107616987 A 3 0015 (2)第二阶梯弱阿片类镇痛药。 用于当非阿片类镇痛药不能满意止痛时或中度癌 性疼痛患者， 主要药物有可待因， 一般建议与第一阶梯药物合用， 因为两类药物作用机制不 同， 第一阶梯药物主要作用于外周神经系统， 第二阶梯药物主要作用于中枢神经系统， 二者 合用可增强镇痛效果。 根据需要也可以使用辅助药。 0016 (3)第三阶梯强阿片类镇痛药。 用于治疗中度或重度癌性疼痛， 当第一阶梯和第二 阶梯药物疗效差时使用， 主要药物为吗啡， 也可酌情应用。

10、辅助药物。 0017 马尾松(学名： Pinus massoniana Lamb.)是松科， 松属乔木， ， 高可达45米， 胸径 1.5米； 树皮红褐色， 枝平展或斜展， 树冠宽塔形或伞形， 枝条每年生长一轮(广东两轮)， 冬 芽卵状圆柱形或圆柱形， 针叶， 细柔， 微扭曲， 两面有气孔线， 边缘有细锯齿； 叶鞘宿存。 雄球 花淡红褐色， 圆柱形， 聚生于新枝下部苞腋， 穗状， 雌球聚生于新枝近顶端， 淡紫红色， 种子 长卵圆形， 4-5月开花， 球果第二年10-12月成熟。 0018 马尾松分布极广， 北自河南及山东南部， 南至两广、 湖南(慈利县)、 台湾， 东自沿 海， 西至四川中部及。

11、贵州， 遍布于华中华南各地。 一般在长江下游海拔600-700m以下， 中游 约1200m以上， 上游约1500m以下均有分布。 是中国南部主要材用树种。 经济价值高。 0019 CN105456308A公开了马尾松皮提取物可以防治肺鳞癌， 其马尾松皮提取物的制备 方法包括将在425条件下， 在马尾松皮粉中加入水浸提110h， 之后超声提取5min 2h， 水提液干燥得到马尾松皮提取物。 0020 CN105456307A公开了马尾松嫩枝皮提取物可以用于防治中晚期肺腺癌。 发明内容 0021 本发明的目的在于克服现有技术的不足， 提供一种疗效好的用于治疗肺鳞状细胞 癌的马尾松老树皮原生粉。 0。

12、022 本发明的另一个目的在于提供一种疗效好的用于治疗癌性疼痛的马尾松老树皮 原生粉。 0023 本发明所采取的技术方案是： 0024 马尾松老树皮原生粉在制备治疗肺鳞状细胞癌药物中的应用。 0025 马尾松老树皮原生粉在制备治疗癌性疼痛药物中的应用。 0026 作为上述应用的进一步改进， 马尾松老树皮的生长年限不少于5年。 更进一步的， 马尾松老树皮的生长年限不少于10年。 0027 作为上述应用的进一步改进， 马尾松老树皮原生粉的粒径为300500目。 中药经 超微粉碎后， 粒度变的更加细小， 有效成分更易于溶出， 药效也相应增强， 从而减少用药剂 量， 大大节约原料药材。 相同剂量下， 。

13、用超微粉碎技术制成超微粉与传统提取物药效比较， 在相同剂量时， 前者的作用更明显， 可显著减少药用资源的消耗。 0028 作为上述应用的进一步改进， 药物为口服制剂。 0029 一种治疗癌性疼痛的药物， 其起效成分为上述的马尾松老树皮原生粉。 0030 药物为口服制剂。 口服制剂包括但不限于片剂、 颗粒剂、 胶囊剂等常见的口服制 剂。 更进一步的， 口服制剂为肠溶口服制剂。 特别的， 口服制剂为缓释制剂。 0031 功能与主治： 主要用于治疗癌性疼痛， 肺鳞状细胞癌。 0032 用法用量： 颗粒剂及冲剂， 标准/袋5g， 成人日服4次， 每次2袋， 四小时服/次， 30天 说 明 书 2/9 。

14、页 4 CN 107616987 A 4 一疗程， 温开水空腹服药。 0033 副作用： 未观察到明显的毒副作用， 无药物依赖性。 0034 禁忌： 孕妇及哺乳期间禁服。 0035 本发明的有益效果是： 0036 发明人经多年的攻克首次发现， 马尾松老树皮粉含挥发油， 是不可缺少的有效成 分， 是对治疗肺鳞状细胞癌及癌性疼痛， 还包括周围型肺癌起到关键而重要的治疗作用， 而 不是马尾松老树皮含有的多糖及生物碱。 马尾松老树皮粉含有一种极为强劲的抗癌有丝分 裂抑制剂及其促进微管蛋白聚合、 抑制微管蛋白解聚的抗癌植物药活性物质， 是至今为止 尚无相关文献报道。 通过实验确证马尾松老树皮超微粉具有强。

15、劲抑癌效果活性物质的药物 活性成分， 首次找到一种抗癌的新型植物药。 0037 进一步研究表明该抗癌植物药制剂中的挥发油成分为强效抗癌抑癌剂， 可识别癌 细胞与非癌细胞， 马尾松老树皮挥发油成分可针对性迅速杀灭癌细胞， 主要用于肺鳞状细 胞癌及癌性疼痛的治疗， 尤其对肺鳞状细胞癌有效率高达99.999.99甚至100， 癌性 疼痛抑制率高达88.599， 可以有效减少癌性疼痛。 0038 中药挥发油成分复杂， 主要是小分子的醛类、 酯类化合物， 单萜、 倍半萜类化合物 和小分子芳香化合物等， 多数为无色或淡黄色， 少数为棕黄色及红色、 绿色等。 挥发油大多 具有特殊的香气， 理化性质活泼。 挥。

16、发油有非常强的挥发性， 纯净的挥发油在常温下可以很 快全部挥发， 在纸上不留油迹。 挥发油的水溶解性较差， 不能大量溶解于水因挥发油分子普 遍含有双键、 杂原子及手性原子其化学性质活泼， 非常容易被氧化分解而失去药理作用。 0039 由于突出的药理作用和活泼的理化性质， 中药挥发油给中药的研究、 生产带来了 许多难题。 对于中药工作者来说， 挥发油相是一个调皮可爱的孩子， 对其又爱又恨。 大多数 中药所含挥发油量很低， 且很容易被氧化、 分解， 在生产中往往提取率较低， 很多药材基本 提不到挥发油， 得到的多数为芳香水； 又因其极易挥发， 得到的挥发油也很难保留在成药 中， 常因制剂过程中加热。

17、干燥而挥发， 或在存储过程中随时间的推移而散失。 0040 马尾松老树皮含有的挥发油组份较为复杂， 提取不当极易损失。 而传统的醇提、 水 提和超临界二氧化碳萃取物， 会导致许多种对癌性疼痛无效。 老树皮含多糖及生物碱和萜 类挥发油化合物芳香族更为强劲药效高于马尾松枝条嫩枝皮， 对癌细胞具有更强的杀伤作 用。 0041 实验结果显示， 马尾松老树皮粉对两种人肺鳞状细胞癌细胞增殖均有明显的抑制 作用， 其IC50分别为NCI-H226(7.500mg/ml)、 NCI-H596(9.258mg/ml)； 同时对两种人肺鳞状 细胞癌细胞均有明显促凋亡作用， 且具有浓度-效应关系； 能将两种人肺鳞状。

18、细胞癌细胞的 细胞周期阻滞于G0/G1期， 且具有浓度-效应关系。 0042 抗癌植物药细胞毒性实验结果显示， 植物马尾松老树皮对正常细胞基本没有抑制 作用。 对肺鳞状细胞癌有效率高达99.999.99甚至100。 癌性疼痛抑制率高达88.5 99。 具相对副作用小， 为植物抗癌新药的研究开发奠定了坚实基础。 该植物药制剂的制备 方法并可适用于产业化。 附图说明 0043 图1是马尾松老树皮原生粉水浸出物在200nm600nm波长下的吸光度曲线； 说 明 书 3/9 页 5 CN 107616987 A 5 0044 图2是马尾松老树皮原生粉水浸出物的液相色谱图； 0045 图3是马尾松老树皮。

19、原生粉水浸出物的另一液相色谱图及其主峰的质谱图； 0046 图4是马尾松老树皮原生粉对肺鳞状细胞癌细胞的浓度-抑制率曲线； 0047 图5是马尾松老树皮原生粉对肺鳞状细胞癌细胞增殖的影响； 0048 图6是不同浓度马尾松老树皮原生粉对肺鳞状细胞癌细胞NCI-H226凋亡的影响； 0049 图7是不同浓度马尾松老树皮原生粉对肺鳞状细胞癌细胞NCI-H596凋亡的影响； 0050 图8是马尾松老树皮原生粉对肺鳞状细胞癌细胞凋亡的影响； 0051 图9是马尾松老树皮原生粉对肺鳞状细胞癌细胞NCI-H226周期的影响； 0052 图10是马尾松老树皮原生粉对肺鳞状细胞癌细胞NCI-H596周期的影响。。

20、 具体实施方式 0053 马尾松老树皮原生粉的制备： 0054 1)取马尾松老树皮， 筛选除杂， 55以下干燥； 0055 2)将干燥后的马尾松老树皮原生粉碎至300500目。 0056 取上述的马尾松老树皮原生粉进行检测， 检测时， 将马尾松老树皮原生粉配制成 300mg/mL的水混悬液， 2530常温浸提， 浸提物去除不溶物后依次使用0.45 m和0.22 m 滤膜过滤， 取滤液进行检测。 检测结果如图13所示。 其中， 图1是马尾松老树皮原生粉(水 浸提物)， 在200nm600nm波长下的吸光度曲线， 显示其在282nm处具有一个峰值， 其吸光度 达1.887； 图2是马尾松老树皮原生。

21、粉(水浸提物)的液相色谱图； 图3是马尾松老树皮原生粉 (水浸提物)的另一液相色谱图及其主峰的质谱图。 0057 下面结合实验， 进一步说明本发明的技术方案。 0058 以下实验中， XL-008指上述方法制备得到的干燥马尾松老树皮原生粉。 0059 植物药XL-008肺鳞状细胞癌生长抑制对照试验 0060 实验委托湖南省实验动物中心(湖南省药物安全评价研究中心)进行。 0061 1实验材料 0062 1.1受试物： 植物药编号： XL-008， 批号： 20170410， 由湖南晓林生物科技发展有限 公司提供。 植物药配制： 称取XL-008 9g， 加入0.9氯化钠注射液15ml， 并振荡。

22、至全部溶解， 即得600mg/ml植物药溶液， 此为最高浓度工作液， 将母液进行除菌处理后备用。 用0.9氯 化钠注射液将母液依次配制成200、 60、 20、 6、 2、 0.6mg/ml的工作液。 0063 1.2阳性对照药： 顺铂(DDP)， 批号： SJJMI-IE， 东京化成工业株式会社； 5-氟尿嘧啶 (5-FU)， 批号： HFBM160120325008， Amresco公司。 阳性对照药配制： 称取DDP或5-FU2mg， 用新 鲜完全培养基配制成100mM的母液， 再用新鲜完全培养基将母液依次配制成200、 60、 20、 6、 2、 0.6 M的工作液。 0064 1.3。

23、主要材料： 说 明 书 4/9 页 6 CN 107616987 A 6 0065 0066 0067 1.4主要仪器： 0068 0069 2试验方法 0070 2.1细胞培养 0071 取已长满的NCI-H226、 NCI-H596细胞， 采用含10FBS的高糖DMEM完全培养基， 于 37、 5CO2培养箱中培养， 根据细胞生长情况， 12d传代或换液， 至对数生长期备用。 0072 2.2CCK-8法检测细胞增殖试验 0073 取对数期生长的NCI-H226、 NCI-H596细胞以每孔5103个细胞接种于96孔细胞培 养板中， 待12h细胞贴壁后， 设置溶媒对照组、 阳性对照药(DD。

24、P)组、 阳性对照药(5-FU)组、 植 物药XL-008组(0.3-300mg/ml)， 每组5个复孔。 溶媒对照组以新鲜完全DMEM培养基孵育细 胞， 植物药组分别以含终浓度为0.3-300mg/ml植物药的新鲜完全DMEM孵育细胞， DDP和5-FU 组分别以含终浓度为100、 30、 10、 3、 1、 0.3 M植物药的新鲜完全DMEM孵育细胞。 按上述处理 方式孵育细胞72h后在每孔中加入CCK-8 10 l， 继续培养1h后使用酶标仪在450nm处测量各 孔的吸光度。 以溶媒对照组OD值为100细胞活力， 其余各组OD值与溶媒对照组OD值的比值 为相对活力。 以细胞增殖抑制率评价。

25、植物药对NCI-H226、 NCI-H596细胞的毒性， 若出现有细 胞增殖抑制率100时， 判为仪器的系统误差， 按100计。 0074 2.3细胞凋亡的检测 0075 2.3.1Annexin V-FITC和PI双染法检测细胞凋亡 0076 取处于对数生长期的NCI-H226、 NCI-H596细胞， 常规消化收集细胞， 以5105/孔 说 明 书 5/9 页 7 CN 107616987 A 7 的密度接种至6孔板中， 待12h细胞贴壁后， 设置溶媒对照组、 植物药XL-008组(10、 30、 100mg/ml)， 每组5个复孔。 溶媒对照组以新鲜完全DMEM培养基孵育细胞， 植物药组。

26、分别以含 终浓度为10、 30、 100mg/ml植物药的新鲜完全DMEM孵育细胞。 6h后， 常规消化收集细胞， 加入 500 l Binding Buffer缓冲液重悬细胞， 将细胞转入1.5ml EP管中， 加入5 l的Annexin V- FITC、 5 l的PI， 在室温避光条件下孵育15min， 用流式细胞仪检测凋亡情况。 0077 2.3.2荧光染色法检测细胞凋亡 0078 按照2.3.1方法处理细胞， 在植物药处理6h后， 在6孔板中每孔加入Hoechst 33342 染色液1ml， 充分覆盖住细胞， 置于37培养20-30min。 弃去染色液， 用PBS洗涤2-3次后在荧 光。

27、显微镜下进行荧光检测。 0079 2.4流式细胞术检测植物药对肺鳞状细胞癌细胞周期的影响 0080 取处于对数生长期的NCI-H226、 NCI-H596细胞， 常规消化收集细胞， 以5105/孔 的密度接种至6孔板中， 待12h细胞贴壁后， 设置溶媒对照组、 植物药XL-008组(100、 30、 10mg/ml)， 每组5个复孔。 溶媒对照组以新鲜完全DMEM培养基孵育细胞， 植物药组分别以含 终浓度为10、 30、 100mg/ml植物药的新鲜完全DMEM孵育细胞。 6h后， 常规消化收集细胞， 用 70冷乙醇固定过夜， 加5 l的PI， 室温避光孵育30min， 用流式细胞仪检测细胞周。

28、期。 0081 2.5统计学分析 0082采用SPSS 16.0统计软件对数据进行处理， 计量资料以表示， 两样本均数的比 较采用Student T-Test检验， 多样本组间均数的比较采用One-way ANOVA检验， P0.05表示 有统计学意义， P0.01表示所检验的差别有非常显著性意义。 0083 结果评价 0084 3.1植物药XL-008对肺鳞状细胞癌细胞增殖的影响 0085 显微镜下观察不同浓度的植物药处理细胞后， 出现细胞增殖速度减慢， 细胞碎片 增多、 细胞间隙增大、 细胞出现沙粒状空泡等现象。 细胞状态与共培养时间有明确相关性， 约在共培养12h后， 细胞出现变圆、 皱。

29、缩的现象； 在共培养24h后， 出现部分细胞胀大， 细胞透 光性变差， 细胞间间隙增大； 在共培养48h后， 细胞出现沙粒状空泡， 出现细胞破裂等情形； 在共培养72h后， 沙粒状空泡样细胞基本完全破裂， 在300、 100、 30mg/ml浓度条件下无完整 细胞形态的细胞， 只见少量浓缩成黑点状。 细胞与供试品或阳性对照药DDP和5-FU共培养 72h后， 细胞增殖受到明显抑制， 且具有浓度-效应关系， 与溶媒对照组比较具有显著性差异 (P0.01)。 细胞增殖抑制结果详见表1。 0086 表1、 植物药XL-008对肺鳞状细胞癌细胞增殖的影响 0087 说 明 书 6/9 页 8 CN 1。

30、07616987 A 8 0088 0089 注： *表示与溶媒对照组比较， P0.05， *表示与溶媒对照组比较， P0.01。 IC50表示 抑制50肿瘤细胞的浓度， Emax表示对肿瘤细胞的最大抑制率。 0090 XL-008对肺鳞状细胞癌细胞的浓度-抑制率曲线如图4所示， A、 B分别为XL-008对 NCI-H226、 NCI-H596细胞的浓度-抑制率曲线。 0091 植物药XL-008对肺鳞状细胞癌细胞增殖的影响如图5示， 箭头表示坏死细胞。 从图 中可以看出， 植物药XL-008可以很好地促进肺鳞状细胞癌细胞坏死。 0092 3.2植物药XL-008对肺鳞状细胞癌细胞凋亡的影响。

31、 0093 采用浓度为10、 30、 100mg/ml的植物药干预肺鳞状细胞癌细胞6h后， 收集细胞， Annexin V-FITC/PI双染后检测细胞凋亡。 流式细胞仪可将双染后的细胞分成4组： Q1-UL代 表机械损伤细胞(Annexin V-/PI+)； Q1-UR晚期凋亡细胞(Annexin V+/PI+)； Q1-LL存活细 胞(Annexin V-/PI-)； Q1-LR早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)。 0094 表2、 植物药XL-008对肺鳞状细胞癌细胞凋亡的影响 0095 说 明 书 7/9 页 9 CN 107616987 A 9 0096 0097 注： *。

32、表示与溶媒对照组比较， P0.05， *表示与溶媒对照组比较， P0.01。 0098 结果表明： 经植物药XL-008处理的NCI-H226细胞晚期凋亡及坏死细胞数明显高于 溶媒对照组(P0.05)， 并具有浓度-效应关系； 经植物药XL-008处理的NCI-H596细胞晚期凋 亡及坏死细胞数明显高于溶媒对照组(P0.05)， 并具有浓度-效应关系。 0099 不同浓度植物药XL-008对人肺鳞癌细胞NCI-H226凋亡的影响如图6所示， 图中， A 为溶媒对照组， B为植物药10mg/ml组， C为植物药30mg/ml组， D为植物药100mg/ml组。 0100 不同浓度植物药XL-00。

33、8对人肺腺鳞癌细胞NCI-H596凋亡的影响如图7所示， 图中， A为溶媒对照组， B为植物药10mg/ml组， C为植物药30mg/ml组， D为植物药100mg/ml组。 0101 植物药XL-008对肺鳞状细胞癌细胞凋亡的影响如图8所示， 箭头表示细胞核皱缩， 提示为凋亡细胞。 从图中可以清楚地看出XL-008可以促使肺鳞状细胞癌细胞凋亡。 0102 3.3植物药XL-008对肺鳞状细胞癌细胞周期的影响 0103 采用浓度为10、 30、 100mg/ml的植物药干预肺鳞状细胞癌细胞6h后， 收集细胞， 用 70冷乙醇固定后， PI染色后， 流式细胞仪分析细胞周期。 实验结果如表3所示：。

34、 0104 表3、 植物药XL-008对肺鳞状细胞癌细胞周期的影响 0105 0106 注： *表示与溶媒对照组比较， P0.05， *表示与溶媒对照组比较， P0.01 0107 结果表明： 在使用植物药XL-008后， G0/G1细胞比例明显增加， G2/M期比例明显减 少， 表明其对肺鳞状细胞癌细胞增殖抑制作用主要是将肺鳞状细胞癌细胞阻滞在G0/G1期， 说 明 书 8/9 页 10 CN 107616987 A 10 阻止其进入S期。 0108 植物药XL-008对人肺鳞癌细胞NCI-H226细胞周期的影响如图9所示， 图中， A为溶 媒对照组， B为植物药10mg/ml组， C为植物。

35、药30mg/ml组， D为植物药100mg/ml组。 0109 植物药XL-008对人肺腺鳞癌细胞NCI-H596细胞周期的影响如图10所示， 图中， A为 溶媒对照组， B为植物药10mg/ml组， C为植物药30mg/ml组， D为植物药100mg/ml组。 0110 4结论与讨论 0111 综上所述， 在本实验条件下， 植物药XL-008可显著抑制2种肺鳞状细胞癌细胞增 殖， 并且具有浓度-效应关系， 在高浓度条件下， 随着时间的延长， 可将癌细胞完全杀死， 其 可将细胞周期阻滞在G0/G1期， 诱导细胞凋亡。 本植物药发挥抑制癌细胞浓度较高， 为mg/ml 级， 可能与其特有的作用机制。

36、相关。 0112 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出的是， 对于本技术领域的普通技 术人员来说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以做出若干改进和润饰， 这些改进和润饰 也在本发明的保护范围之内。 说 明 书 9/9 页 11 CN 107616987 A 11 图1 说 明 书 附 图 1/10 页 12 CN 107616987 A 12 图2 说 明 书 附 图 2/10 页 13 CN 107616987 A 13 图3 说 明 书 附 图 3/10 页 14 CN 107616987 A 14 图4 说 明 书 附 图 4/10 页 15 CN 107616987 A 15 图5 说 明 书 附 图 5/10 页 16 CN 107616987 A 16 图6 说 明 书 附 图 6/10 页 17 CN 107616987 A 17 图7 说 明 书 附 图 7/10 页 18 CN 107616987 A 18 图8 说 明 书 附 图 8/10 页 19 CN 107616987 A 19 图9 说 明 书 附 图 9/10 页 20 CN 107616987 A 20 图10 说 明 书 附 图 10/10 页 21 CN 107616987 A 21 。