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（出于对案例来源猪场隐私的保护，我们对案例１文章进行了相关信息的保密，今重新发布，见今日推文第二条。对猪场及读者造成的不便敬请谅解。） 冠状病毒，毒如其名，是当今世界知名度最高的病毒。
王冠样的冠状病毒 它实至名归，称得上病毒届的王者，可对脊椎动物的多个系统造成致命性的感染。例如主要侵害呼吸系统的人类新冠病毒，主要侵害神经系统的猪血凝性脑脊髓炎病毒和今天的主角——侵害猪消化系统的丁型冠状病毒（PDCoV）。 本篇是该腹泻系列的最后一篇文章，将为大家展现丁型冠状病毒是如何将仔猪的肠道当作自己的“复制工厂”的，以及不同感染阶段仔猪不同肠段的不同病理变化及与其他检测信息之间的联系。 1. 病史调查 一家母猪场产房仔猪的死亡率突然升高
产房哺乳仔猪死亡率达到40.4% 腹泻监测结果发现粪便中很高载量的丁型冠状病毒和偶然出现的轮状病毒。
腹泻粪便中PDCoV强阳性，偶见轮状病毒单独或共感染 2. 采样寄送 与现场驻场兽医沟通进行采样送检，挑取5头未使用抗生素治疗的活体急性腹泻仔猪和1头活体正常仔猪，进行剖检取材。 其中，取每头猪的肠系膜淋巴结进行qPCR病原检测、细菌分离和组织病理观察；取空肠进行组织病理观察；取回肠进行qPCR病原检测和组织病理观察；15mL离心管收集直肠末端粪便进行粪便检查。 具体采样寄送要求见下表：
如果是首次和驻场兽医合作，从实验室为他们准备、邮寄包含剖检取材所用器械、采样容器的采样包，并做好必要的备注，这些细心的准备是提高合作效率、保证样品质量的有效方法。
4. 实验室诊断——粪便虫卵检查 使用案例1相同的方法进行粪便虫卵检查
首先观察粪便形态，可见1号猪和6号猪粪便形态较正常，无腹泻症状，无法与漂浮液混匀，未进行显微镜观察；2号猪粪便粘稠状；3号、5号猪粪便呈水样；4号粪便奶酪状。 载玻片蘸取液体表面漂浮物，在显微镜下观察，结果发现2号猪粪便漂浮液中有大量柱状的肠上皮细胞；3号粪便中有大量脂滴；4号、5号粪便中有大量无定形物质
4. 实验室诊断——病原检测 常见腹泻病毒qPCR检测结果显示，６头猪空肠和/或肠系膜淋巴结中均为PDCoV阳性。其中2号猪回肠Ct值达到13.37（Ct值越低，病毒载量越高），1号猪和6号猪回肠病毒载量较低。虽然没有进行严格的定量，但我们还是粗略看到回肠病毒载量与猪只粪便状态之间的吻合关系。
5实验室诊断——细菌分离 在超净台中，取6头仔猪的肠系膜淋巴结进行细菌分离。 具体操作为：用镊子取淋巴结在75%酒精中涮洗，然后在酒精灯上点燃，待酒精燃尽，用火焰灭菌的剪刀在淋巴结上剪一个切面，之后用镊子捏着淋巴结远离切面的一端，使切面隆凸，用淋巴结切面在麦康凯培养基上均匀地涂抹，37℃恒温培养过夜，观察菌落生产情况。如有单一/优势菌落，则用接种环挑取单一菌落再次接种新的麦康凯培养基进行细菌纯化。 结果2号猪和5号猪分离纯化到单一的红色菌落；其他猪只肠系膜淋巴结未分离到任何细菌。
对分离到的细菌进行革兰氏染色、16s rDNA测序鉴定、大肠杆菌特异基因uidA检测、肠杆菌科细菌生化鉴定，结果均为大肠杆菌（图略）。但PCR未检测到产肠毒素大肠杆菌的主要黏附素基因F4(K88)､F5(K99)､F6(987P)､F18和F41（缺乏阳性对照） 。 5. 实验室诊断——组织病理 取1、2、3、5、6号猪空肠、回肠和肠系膜淋巴结进行组织病理观察，结果总结如下： 首先我们来看没有腹泻症状的6号猪的空肠和回肠，以作为正常对照：
空肠-6号猪
回肠-6号猪
肠系膜淋巴结-6号猪
空肠-3号猪
空肠-5号猪
回肠-5号猪
空肠-2号猪
回肠-2号猪
肠系膜淋巴结-2号猪 综上，可见空肠、回肠上皮细胞损伤广泛而严重，细胞病变过程基本表现出先空泡化、后崩解脱落的规律，其中2号猪空肠上皮细胞未表现出空泡变性即发生广泛脱落。另可见新生的肠上皮细胞（立方形）发生空泡化，疑似病毒对新老上皮细胞的隔代感染复制（病毒可视为专嗜细胞的寄生生物）。 2号仔猪空肠大量脱落的上皮细胞与粪便检查中发现的大量细胞相吻合，并于其回肠极低的Ct值相联系。
推测的病变发展规律 2号猪肠系膜淋巴结分离到大肠杆菌，与观察到的回肠上皮细胞杆状细菌黏附有潜在的联系。 ６. 诊断结果 本案例为丁型冠状病毒造成的严重急性腹泻，并存在大肠杆菌的继发／伴发感染。 建议疾病净化，采取与应对PEDV疫情相同的应急预案。 （全文完） |
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