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Worthington 新生儿心肌细胞分离系统的开发旨在为研究人员提供可靠、方便和一致的新生大鼠心肌细胞分离方法。通过使用纯化的而不是粗制的酶制剂，可以最大限度地减少批次间的差异。此外，Worthington 通过从新生大鼠心脏中分离心肌细胞对试剂盒进行使用测试，以确保活细胞的性能、可靠性和一致的产量。 该试剂盒是与 Ronal MacGregor 博士合作制定的。该方法基于 Toraason 等人描述的方法。Toxicol, 56 , 107 (1988)，其中将切碎的组织与纯化的胰蛋白酶在 2-8°C 下孵育过夜。正如 Toraason 所指出的，与在温胰蛋白酶或胶原酶中连续孵育所涉及的时间相比，此步骤减少了收获细胞所需的手动操作时间。使用纯化的胶原酶而不是粗胶原酶来最大化产量和活力。 Worthington新生儿心肌细胞分离系统内容： 该包装包含足够的材料，可用于五个单独的组织解离，每个包含多达 12 个心脏。对于较大或较小的组织样本，在每个步骤中准备相应体积的试剂，并按照协议中所述的相同比例将它们组合起来。 · 小瓶 1 : 1 瓶，500 毫升：无菌不含钙和镁的汉克平衡盐溶液 (CMF HBSS)，pH 7.4。除了用作解离的介质外，该溶液还用于重构小瓶 #2 和 #3 的内容物。 · 小瓶 2：5 小瓶，每瓶 1000 µg：Worthington 胰蛋白酶（代码：TRLS），3X 结晶，用 1mM HCl 透析，通过 0.22 微米孔径的膜过滤，并冻干。使用前，用 2ml CMF HBSS（1 号小瓶）复溶并轻轻旋转以溶解内容物。储存在 2-8°C。 · 小瓶 3： 5 小瓶，每瓶 2000 µg：Worthington 大豆胰蛋白酶抑制剂（代码：SIC），一种 0.22 微米孔径的膜过滤冻干粉末。使用前，用 1ml CMF HBSS（1 号小瓶）复溶并轻轻旋转以溶解内容物。储存在 2-8°C。 · 小瓶 4：5 小瓶，每个 1500 单位：Worthington 纯化胶原酶（代码：CLSPA），一种 0.22 微米孔径膜过滤的冻干粉末，经过色谱纯化。它每毫克含有少于 50 个酪蛋白酶单位，由两种可分离但非常相似的胶原酶组成。使用前，用 5ml Leibovitz L-15 培养基（如下所述制备）复溶并轻轻旋转以溶解内容物。储存在 2-8°C。 · 装有 Leibovitz L-15 培养基粉末的袋子：1 x 1L，通过切开信封顶部并将内容物倒入装有 800 毫升细胞培养级水的烧杯中来重构袋子的全部内容物。用额外的 100 毫升冲洗袋子 2-3 次。使总体积达到 1 升并通过 0.22 微米孔径的过滤器过滤。 该试剂盒还包括 5 个细胞过滤器 (Falcon)，这是一张将酚红颜色与 pH 值相关联的卡片，用于检查平衡盐溶液和培养基。 Worthington新生儿心肌细胞分离系统参考文献： 1.Engelmann, G., McTiernan, C., Gerrity, R., Samarel, A.： 技术 2 , 279, 1990 3.Fratalli, V. 和 Steiner, R.： 大豆抑制剂。一、从商品粗制大豆胰蛋白酶抑制剂中分离出三种抑制剂及其一些性质 ， 生物化学 7 , 521, 1968 4.Freshney, R. Ian： 《动物细胞培养基本技术手册》，第 4 版。,, Wiley-Liss, Inc., 纽约, , 2000 5.Gross, W.、Schopf-Ebner, E. 和 Bucher, O.： 分离心肌细胞均质培养物的制备技术 ， Exp Cell Res 53 , 1, 1968 |
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