|
Worthington 胰蛋白酶抑制剂分类： 1、利马豆抑制剂：利马豆胰蛋白酶抑制剂可抑制牛以及人胰蛋白酶和纤溶酶，通过形成等摩尔复合物作用于胰蛋白酶和糜蛋白酶。利马豆抑制剂可以色谱分离为多达六种变体。Jones et al., Biochem., 2 , 66, (1963) 表征了其中的四个。均具有相似但不相同的氨基酸组成，含有六个或七个二硫键，缺乏蛋氨酸和色氨酸。分子量在 8 kDa 和 10 kDa 之间变化。 稳定性/储存： 利马豆抑制剂在 2-8°C 下可稳定 1-2 年。 卵类粘蛋白：卵类粘蛋白是禽蛋清的糖蛋白蛋白酶抑制剂。蛋清中有几种蛋白酶抑制剂。Worthington 胰蛋白酶抑制剂是 Lineweaver 和 Murray JBC, 171 , 565 (1947) 所描述的，它的分子量约为 28 kDa。 稳定性/储存： 卵类粘蛋白在 2-8°C 下可稳定 1-2 年。 2、胰腺抑制剂：Worthington 胰腺抑制剂通常被称为 Kunitz 抑制剂，由 Kunitz 和 Northrop J. Gen. Physiol., 19 , 991 (1936) 首次结晶。它与 pH 值 3 和 10 之间的牛胰蛋白酶以及人胰蛋白酶形成非常稳定的 1:1 复合物。胰凝乳蛋白酶也被该产品抑制，但结合不那么紧密。另一方面，猪弹性蛋白酶的酯水解、蛋白水解和弹性水解活性没有受到抑制。Kunitz 抑制剂是 58 个氨基酸的单多肽链，分子量为 6.5 kDa。当以肺组织为来源时，抑制剂称为抑肽酶。 稳定性/储存： 胰抑制剂在 2-8°C 储存时可稳定 1-2 年。 3、大豆抑制剂：大豆胰蛋白酶抑制剂于 1945 年由 Kunitz shou次结晶，是在大豆中发现的几种此类抑制剂之一。其分子量为 21,500 ± 800 道尔顿，最适 pH 值为 7.0。大豆抑制剂抑制胰蛋白酶摩尔对摩尔，并在较小程度上抑制胰凝乳蛋白酶。 稳定性/储存： 大豆抑制剂在 2-8°C 下可稳定保存 1-2 年。 Worthington 胰蛋白酶抑制剂单位定义：抑制剂的活性表示为每毫克抑制剂所抑制的两次结晶胰蛋白酶（Worthington Code：TRL）的量。1mg TRL ≥180 TAME 单位、10,350 BAEE 单位、3,450 USP/NF 单位。 
Worthington胰蛋白酶抑制剂测定方法： 用分光光度法测量各种胰蛋白酶抑制剂防止苯甲酰基-L-精氨酸乙酯的胰蛋白酶水解的能力。当前未分配任何活动单位。抑制剂的活性表示为被一毫克抑制剂抑制的两次结晶胰蛋白酶（TRL）的量。 试剂： 1.胰蛋白酶试剂：0.25 mM 苯甲酰基-L-精氨酸乙酯在 0.067 M 磷酸盐缓冲液中，pH 7.0 2.0.001 N 盐酸 3.0.5 M 磷酸钠钾缓冲液，pH 6.5 4.胰蛋白酶溶液：在 0.001 N HCl 中制备 0.5 mg/ml 的胰蛋白酶（Worthington 代码：TRL）。 5.抑制剂：溶解各种抑制剂如下： 利马豆抑制剂： 1% NaCl 中 1 mg/ml 卵类粘蛋白： 1 mg/ml 在 0.001 N HCl 中 胰酶抑制剂： 1 mg/ml 在 0.001 N HCl 中 大豆抑制剂： 1 mg/ml 在 0.01 M 磷酸盐 缓冲液中，pH 6.5，含 0.15M NaCl Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。
|
