本文阐述了DELFIA® EuTDA法在不同场景中,如:CAR-T、CAR-NK和抗体依赖的细胞毒性(ADCC)检测细胞杀伤功能的应用。该方法灵敏度高,特异性好,适用范围广等优势,得到广泛的认可。 技术原理介绍 注:下文中BATDA法亦指DELFIA®EuTDA法。 CAR-T杀伤功能评价 Zhicai Lin等人在《Evaluation of Nonviral piggyBac and lentiviral Vector in Functions of CD19 chimeric Antigen Receptor T Cells and Their Antitumor Activity for CD19+ Tumor Cells》一文中使用BATDA法评价病毒转座子(piggyBac)和慢病毒载体(LV)转染对CAR-T细胞杀伤的功能分析。1×105Raji细胞在37°C下用BATDA标记30 min,后用PBS洗涤三次以去除多余的BATDA。CD19pb CAR-T细胞和CD19lv CAR-T细胞添加到BATDA标记Raji细胞96孔V底板,效靶(E:T)比16:1,8:1,4:1,2:1和1:1,37°C,5%CO2条件下孵育4小时。取上清,加入Eu solusion,选择酶标仪TRF读板。 与Mock T细胞相比,CD19pbCAR-T细胞和CD19lvCAR-T细胞均具有较高的细胞毒性。虽然CD19pbCAR-T细胞在E:T为4:1和16:1时杀死CD19+WTRaji细胞,但CD19pbCAR-T细胞在任何E:T下对CD19KORaji细胞没有细胞毒性。CD19pbCAR-T细胞用于靶向CD19的ScFv具有特异性和有效性。 CAR NK杀伤功能评价 Alejandra Leivas等人在《NKG2D-CAR-transduced natural killer cells effificiently target multiple myeloma》一文中采用BATDA法进行体外杀伤功能检测。NKAE和T细胞产物对MM细胞的EuTDA释放试验评估细胞毒性。以U-266、L-363、OPM-2骨髓瘤细胞和原代多发性骨髓瘤(MM)细胞作为靶细胞,与效应细胞按指定的靶细胞(E:T)比例孵育4小时。为了检测CAR转导的效应细胞的安全性,我们以供体PBMC、CCD-18Co和NL-20细胞系为靶点,进行了细胞毒性试验。 NKAE细胞对U-266MM细胞系表现出强大的细胞毒性活性,在最大E:T比值(32:1)时,破坏了77.7%的MM细胞。与NKAE细胞相比,CAR-NKAE细胞表现出更好的细胞毒性,在E:T为8:1已破坏100%的MM细胞。与CAR T相比,CAR-NKAE对MM细胞系表现出更强的细胞毒性。 抗体依赖的细胞毒性ADCC Steven W等人在《FcγR Binding and ADCC Activity of Human IgG Allotypes》研究中分别对抗CD20,抗CD52,抗RhD和抗TNP抗体ADCC进行了评价。IgG2和IgG4没有诱导NK细胞介导的ADCC活性,这与其与FcγRIIIa的结合很弱相一致。在IgG1能有效且类似地诱导ADCC(~70%杀伤),在IgG1之间没有观察到差异,在IgG3中,诱导ADCC的能力差异很大,从20%到80%,这仅与SPR测量的亲和力差异部分匹配。为了确定我们的发现是否具有抗原依赖性,我们还在一个以TNP化红细胞作为靶细胞的平行实验中分析了抗TNP IgG的ADCC能力。抗TNP ADCC数据与抗RhD抗体的ADCC数据非常相似。 DELFIA® EuTDA法综合评价 相关推荐:
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