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了解基本的酶动力学理论对于酶分析很重要，以便了解基本的酶学机制和选择酶分析方法。选择用于测量酶活性的条件与选择用于测量其底物浓度的条件不同。有几个因素会影响酶促反应进行的速率——温度、pH、酶浓度、底物浓度以及任何抑制剂或活化剂的存在。接下来看看worthington对酶浓度的影响分析： 为了研究增加酶浓度对反应速率的影响，底物必须过量存在；即，反应必须与底物浓度无关。在特定时间段内形成的产品量的任何变化将取决于存在的酶水平。从图形上看，这可以表示为（图1）： 这些反应被称为“零级”，因为速率与底物浓度无关，并且等于某个常数 k。产物的形成以与时间成线性的速率进行。添加更多的底物不会提高速率。在零级动力学中，允许测定运行双倍时间会导致产物量翻倍（图2）。 反应中存在的酶量是通过它催化的活性来衡量的。活性和浓度之间的关系受到许多因素的影响，例如温度、pH 等。必须设计酶测定法，以便观察到的活性与存在的酶量成比例，以便酶浓度是的限制因素。只有当反应为零级时才满足。
在图 3中，活动与区域 AB 中的浓度成正比，但在 BC 中不成正比。当底物浓度不受限制时，酶活性通常最大。当酶促反应产物的浓度与时间作图时，会得到类似的曲线，图4。 在 A 和 B 之间，曲线代表零级反应；也就是说，速率随时间恒定的一种。随着底物用完，酶的活性位点不再饱和，底物浓度变为限速，反应变为 B 和 C 之间的一级反应。 为了理想地测量酶活性，必须在反应为零级的曲线部分进行测量。一个反应最初很可能是零级的，因为此时底物浓度最高。为了确定反应是零级的，必须对产物（或底物）浓度进行多次测量。 图 5 说明了酶分析中可能遇到的三种类型的反应，并显示了如果只进行单次测量可能会遇到的问题。 B是代表零级反应的直线，它允许准确测定部分或全部反应时间的酶活性。A 代表图 4 中所示的反应类型。该反应最初是零级，然后变慢，可能是由于底物耗尽或产物抑制。这种类型的反应有时被称为“引导”反应。真正的“潜在”活动由虚线表示。曲线 C 表示具有初始“滞后”阶段的反应。虚线再次代表潜在可测量的活动。产品浓度的多次测定可以绘制每条曲线并确定真实活性。 worthington酶热门研究： 胶原酶 脱氧核糖核酸酶 I 弹性蛋白酶 木瓜蛋白酶 核糖核酸酶 胰蛋白酶 |
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