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CD4+ T细胞是适应性免疫和先天性免疫反应的重要媒介，是人类免疫缺陷病毒（HIV）的主要储存库。由于缺乏有效的基因操作方法，目前还无法对静息CD4+ T细胞进入深入研究，这限制了人们理解HIV感染及寻找有效的治疗方法。 德国慕尼黑大学的Manuel Albanese等报告了一种优化方案，能够对真正静息的CD4+ T细胞进行基因编辑。研究人员优化了细胞培养，在平板培养皿上低密度培养人CD4+ T细胞，这些细胞在补充低剂量IL-7和IL-15的培养基中保持静息状态，可存活长达6周。 以这种方式培养的CD4+ T细胞可以使用CRISPR方法进行基因编辑，效率接近100%。为了证明这一点，作者同时敲除了6个基因，其中包括5个在HIV感染中起重要作用的基因（CD4, CXCR4, PSGL-1, TRIM5α 和CPSF6）。 此外，研究还证明了将双链DNA供体模板敲入不同的内源性位点，从而能够在单细胞分辨率下研究细胞和病毒成分的生理相互作用。 这种优化的方案也可用于将绿色荧光蛋白报告基因（eGFP）敲入特定位点，并用于HIV感染研究。
图1 在人类静息CD4+ T细胞中建立多克隆基因敲除的管道示意图 |
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