|
在过去的十年中，等温扩增(如HCA、MDA和环介导等温扩增LAMP)在即时护理(POC)诊断中发挥了越来越重要的作用。 等温扩增具有与qPCR相似的灵敏度和特异性，但是在快速、低成本和便携性方面具有优势，因此成为在资源有限环境下可用来进行现场检测的理想选择。 LAMP反应产物的检测方法包括：电泳法、浊度法和染料法，其中电泳法和浊度法是终点检测法，而染料法现在更为常用，可实现实时检测。 LAMP染料法中用的染料包括两种：
本文整理了近十年来常用的几种染料，供各位同仁开发LAMP检测试时参考选择。 荧光染料 常见的自发光荧光染料有： 羟基萘酚蓝HNB和钙黄绿素Calcein。
一种金属离子指示剂, 变色原理为:HNB与镁离子结合使得反应体系初始颜色为紫罗兰色,随着反应的进行,Mg2+与析出的焦磷酸根离子反应生成焦磷酸镁沉淀,羟基萘酚蓝失去了镁离子使得体系颜色变为天蓝色,而未反应的体系则仍保持着紫罗兰色 。
常见的嵌合型荧光染料有：Sybr Green，EvaGreen，Syto。这一类染料会渗入到DNA双链的小沟中，与双链DNA结合以后，荧光信号会增强 800~1000倍。
↓常见的荧光染料整理对比↓
（点击看大图）
不同浓度荧光染料对LAMP检测的灵敏度对比 当然，通过把荧光染料滴加在反应管的管盖上，反应结束以后，将染料弹入或离心与反应体系混匀，这种操作方式可以避免Sybr Green对反应效率的影响以及产生气溶胶污染。 荧光染料法可以通过将染料加入到反应中从而实现实时和视觉检测，适合用于要求高灵敏度的POC检测中。 比色染料 LAMP反应在合成DNA的过程中，释放的副产物包括焦磷酸根和氢离子，因此反应液的pH值会随着反应进行而产生变化，由初始碱性变为酸性，如此显著的pH值变化为探测LAMP反应产物提供了另一种可能，即通过使用pH敏感指示剂作为染料检测DNA扩增，实现肉眼对扩增结果可视化的判断，区分阳性和阴性结果。 使用pH指示剂为染料的反应要求反应液低缓冲度（低浓度Tris），pH值8.8以上。pH指示剂染料浓度在50-100uM/反应（2）。 常用在LAMP反应中的pH指示剂为：
不同pH指示剂在LAMP反应中的颜色变化 使用pH指示剂作为染料的方法，让低成本、便携式的快速LAMP检测更容易实现和普及，但是，pH染料指示剂不使用所有等温扩增方法，例如解旋酶依赖性扩增(HAD）。
迈迪安推出的Specimen-specific™ 特定样本类型LAMP预混液是最新一代的LAMP预混液专门为简化便携式LAMP检测研发而优化的配方重新定义LAMP分子POC检测无限可能！
 迈迪安的所有产品都可以提供商业大规模生产，符合ISO13485标准，并大量用于全球各种获得认证的商用检测中。 ↓欢迎联系我们咨询订购↓ 参考资料： 1. https://www./articles/10.3389/fmicb.2019.02234/full 2. https://www./doi/10.2144/000114253 3. https://www.ncbi.nlm./pmc/articles/PMC6803449 精选专题  End |
|
|
来自： 亮剑7mgtxtuz0o > 《ivd专业》
