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导语 ▍▎▏ Part.1 PD-L1在不同组织中的表达是怎样的？ PD-1是一种叫做“程序性死亡受体1”的蛋白，主要表达在T细胞表面，它可以与肿瘤细胞表面的PD-L1结合，抑制T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，从而导致肿瘤免疫逃逸的结果。PD-1/PD-L1抗体药物可以阻断这种相互结合，恢复T细胞对肿瘤的杀伤作用，从而起到治疗癌症的效果。所以，肿瘤组织中PD-L1的表达与PD-1药物的疗效有着很大的相关性。 PD-L1在多种肿瘤中广泛表达，不同肿瘤中的PD-L1表达水平不同。如下图所示，胸腺癌和弥漫大B 细胞淋巴瘤的PD-L1阳性率最高（51%–58%），而腺样囊性癌和阑尾肿瘤样本均无PD-L1阳性[1]。  图片来自Mark Yarchoan et al. Journal of clinical investigation Insight 2019 ▍▎▏ Part.2 PD-L1检测体系的确定？ 免疫组织化学检测PD-L1表达作为抗PD-1/PD-L1治疗的预测性生物标志物，国内外专家一致推荐，需根据药物-疾病-诊断分析（3D）原则进行选择，即PD-L1免疫组织化学抗体需与配套的检测系统在对应的检测平台中进行，不能随意更换。  3D原则 目前临床上，PD-L1 检测主流方式是 4 种克隆号对应 2 种检测平台。当进行PD-L1检测时，首先要保证不同克隆号的PD-L1在相应的检测平台上进行，这样才能保证检测结果的准确性和可重复性。如下图所示，同样是28-8的抗体，在不同平台上的检测结果强弱也是有明显差异的[5]。所以在对应的平台上进行检测是十分必要的。  图片来自于Mod Pathol. 2018 Nov;31(11):1630-1644. ▍▎▏ Part.3 样本类型有哪些？ PD-L1的检测标本主要是石蜡标本，来源主要包括：一是手术切除标本；二是支气管镜、经皮穿刺的活检标本；三是胸水等包埋的细胞块标本。 手术组织标本： 手术标本应选择病变组织的代表性蜡块进行PD⁃L1检测，应避免选择含有坏死组织、挤压细胞及固定不佳等标本块。有研究表明，同一肿瘤多个蜡块之间PD⁃L1表达率一致性较高。 用于PD-L1 IHC检测的组织样本保存时间不能超过3年。在ATLANTIC研究中（如下表），研究者对比了≤3年和>3年所获得的肿瘤标本PD-L1表达情况，结果显示，≤3年内获得的标本与近期获取的标本之间PD-L1表达率一致性较高，而存储时间>3年的标本中PD-L1高表达比例明显下降[6]。  J Clin Oncol, 2016, 34(15 suppl): 3025. 穿刺样本： 活检标本数量会显著影响PD-L1表达检测的准确性。多个研究表明，穿刺样本需要至少穿3-4条，才能达到90%以上的一致率。至于在多条穿刺样本中怎么选择，有研究表明（如下表所示），在穿刺的多条样本中PD-L1表达值最高的活检标本与手术标本的一致性最高[7]。  J Thorac Oncol (IF: 15.61; Q1). 2018 Aug;13(8):1113-1120. 细胞学标本： 有研究表明，在TPS≥50%一档，活检样本和细胞块相比组织样本，有更高的阳性率。因此，采用细胞学样本与组织学样本的一致性不是很好[8]。同时，使用细胞蜡块的时候，在实际检测中，往往视野中细胞数量过少，且不容易区分是否为肿瘤细胞。因此，各大专家共识和指南不推荐使用细胞学样本。 原发灶与转移灶标本： 晚期恶性肿瘤患者，临床上无法获取原发肿瘤组织，可在获得的转移灶中进行PD⁃L1检测。当同时获得原发灶及转移灶标本时，推荐均进行PD⁃L1检测，并分别报告检测结果。一项纳入了35个配对样本的研究结果显示，当检测原发灶和转移性淋巴结样品进行检测时，PD-L1的表达显示了显著的差异，如下图。尤其是高表达的样本中，差异更为明显。该研究表明，淋巴结转移样本的检测结果不能代表原发灶的PD-L1表达情况，尤其是淋巴结转移样本的阴性结果，如果采用很有可能造成漏检[9]。  J Thorac Dis (IF: 2.9; Q3). 2019 Dec;11(12):4982-4991.   一、检测前的质量控制 推荐优先在石蜡包埋肿瘤组织标本切片中进行PD-L1免疫组织化学检测：手术切除标本和活检标本均可用于 PD-L1 检测。手术标本选择代表性蜡块进行PD-L1检测，应避免选择含有坏死组织、挤压细胞及固定不佳等标本块。  PD-L1检测前需要对HE染色的切片进行评估，观察是否存在脱片、皱褶、未染色等现象，这些情况可导致切片上肿瘤细胞数量减少、非特异性染色或假阴性等结果。评估HE切片中肿瘤细胞数量和（或）肿瘤相关免疫细胞：22C3及28-8检测系统要求HE染色切片中至少存在100个活肿瘤细胞；SP142检测系统要求包含至少 50 个活肿瘤细胞和（或）肿瘤相关间质。如HE染色切片不合格，无法进行下一步检测，应再次切片或重新挑选蜡块。 二、PD-L1检测的对照选择 目前各种文献、指南均推荐使用扁桃体或胎盘组织作为PD-L1免疫组化检测的阳性对照。一般胎盘组织PD-L1表达阳性强度要高于扁桃体，但表达强度基本一致；而扁桃体表达呈现出强弱不等的表达。在扁桃体中，大多数生发中心巨噬细胞呈现弱到中等强度的点状胞膜染色，大多数上皮隐窝细胞呈现中等到强的染色，而大多数淋巴细胞(外套层和生发中心B细胞)和浅表上皮细胞无染色，这种不同强度的表达方式有助于对肿瘤组织进行判读。可以根据习惯采用适合的阳性对照组织，但原则上应采用上述2种组织，这样检测结果才能具有可比性。  (左)低倍镜下可见PD-L1在扁桃体中的着色分布;(中)隐窝上皮细胞处呈细胞膜强阳性着色;(右)生发中心内巨噬细胞呈弱阳性着色同时，还需要设置病人自身标本的阴性对照及常规未有抗体标记的扁桃体或胎盘组织的阴性对照，以排除自身因素产生的干扰。对照切片染色失败，则该轮所有患者的PD-L1染色结果视为无效，需分析原因，并重新进行染色。 三、结果判读的质量控制 在PD-L1免疫组化检测结果的判读中，以下几个方面需要进行质量控制的。1. 是检测组织中的肿瘤细胞数量。根据文献或指南，对于PD-L1检测至少需要计数100个活的肿瘤细胞，这样检测结果才具有可靠性。然而，并不是所有样本均符合这个要求，所以，当肿瘤细胞数量不足100时，应该在检测报告中明确注明样本中的肿瘤细胞数量，这样才能有助于临床医生的治疗决策。2. 确定PD-L1的阳性表达必须是细胞膜阳性，而不管其强弱程度。如果出现细胞质阳性或模糊不清的阳性时，均不能判读为PD-L1表达阳性。表3 PD-L1表达强度 避免误判。肿瘤组织内会有一些巨噬细胞，这种情况在肺癌内特别明显。肺泡腔内的巨噬细胞会表达PD-L1，此时不应将其误认为肿瘤细胞阳性而判读为PD-L1阳性。还有，坏死周围及切片周围的肿瘤组织也可有PD-L1表达，这个可能为坏死组织内的抗原弥散或边缘效应而导致的假象，应避免判读为阳性。肺是开放性器官，经常会有一些碳尘颗粒等沉积，会误认为是PD-L1表达，也需要进行鉴别。最后，组织内的挤压也会导致PD-L1表达，也不能将其判读为阳性。表4 NSCLC的TPS评分要素 如若您有想看的内容主题 欢迎在下方评论区留言 秀威推出病理整体解决方案，助力病理科建设 向上滑动阅览 |
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