本发明专利技术涉及癌细胞的诱导转化技术领域，提供了一种将癌细胞诱导分化成脂肪细胞的方法，所述方法包括：(1)将癌细胞于基础培养基中进行培养，待细胞汇合度达80‑100％时，进行诱导分化；(2)将步骤(1)的基础培养基换成诱导分化培养基①，培养4‑8天；(3)将诱导分化培养基①换成诱导分化培养基②，培养1‑4天；(4)换成基础培养基，培养6‑12天，将癌细胞成功诱导分化成脂肪细胞；本发明专利技术方法将恶性增殖、转移的癌细胞转变为成熟的脂肪细胞，分化形成的脂肪细胞既含有脂肪滴，又高表达成熟脂肪细胞的标志基因。本发明专利技术方法有效抑制癌细胞的增殖和转移，为临床上的癌症治疗提供新思路、新方法，应用前景良好。
【技术实现步骤摘要】
一种将癌细胞诱导分化成脂肪细胞的方法
本专利技术涉及癌细胞的诱导转化
，具体提供了一种将癌细胞诱导分化成脂肪细胞的方法。
技术介绍
在癌症病情发展过程中，存在一个叫做“上皮-间充质转化”(EMT，epithelial–mesenchymaltransitions)的阶段，该阶段内，癌细胞具有类似于“干细胞”的特质，有潜力转化成多种细胞类型。上皮细胞可向间质细胞形态转化，导致细胞极性丧失、黏附能力下降、细胞骨架发生变化，从而增强细胞迁移和运动的能力，利用EMT这些癌细胞会从初始的肿瘤中脱离，向远处发生转移。研究证实EMT是与癌症的侵袭和转移有牵连的关键事件。肿瘤细胞经过血液循环传播后，肿瘤细胞会发生间质上皮转化(MET，mesenchymal–epithelialtransitions)，形成继发性的肿瘤转移灶。MET是EMT的逆过程，癌细胞由间质细胞形态变回上皮细胞形态，增殖能力增强，生长更快。科学家在小鼠身上使用罗格列酮联合MEK抑制剂曲米替尼，让乳腺癌细胞分化成脂肪细胞，降低了肿瘤的侵袭性，抑制了肿瘤转移，其主要采用的方法是：将乳腺癌细胞接种到培养皿中，过夜培养后用200ng/ml的人源重组BMP2蛋白处理3天，然后用200ng/ml的BMP2和2uM的Rosiglitazone(罗格列酮)处理4天，然后再用2μM的罗格列酮处理3天。其采用的培养基为含有10％胎牛血清的DMEM培养基。结果显示，经过罗格列酮+骨形成蛋白-2(BMP-2)的诱导后，EMT后的乳腺癌细胞转化成了脂肪细胞，表达各种脂肪细胞标志物，对异丙肾上腺素和胰岛素的反应也跟脂肪细胞一样；并且在诱导分化9天后之后，研究人员撤去诱导分化培养基，换上普通培养基，观察发现这些分化成的脂肪细胞保持着脂肪细胞的特征，并没有出现恢复成间充质样的癌细胞的情况，证实这种诱导分化是不可逆的。但是这种癌细胞诱导分化方法存在明显的缺陷：该方法只能将EMT之后的癌细胞诱导分化成脂肪细胞，即只能将处于间充质状态的癌细胞诱导分化，而不能将处于上皮状态的癌细胞诱导分化。该方法中BMP2的使用就是为了促进癌细胞EMT转化。因此，该方法对癌细胞的诱导分化条件苛刻，具有很大局限性，只能诱导分化处于间充质状态的癌细胞，不具有普适性。专利技术人前期研究中，成功将正常的人皮肤成纤维细胞诱导分化成脂肪细胞(参见申请号为2019108760496的中国专利)，但正常的人皮肤成纤维细胞与癌细胞在生长发育、生理机制等方面存在明显的不同，主要表现在：第一，人皮肤成纤维细胞传代次数有限，不具有无限增殖、转移的能力，不会经历EMT或者MET转化。而癌细胞属于无限增殖细胞，并具有恶性转移的能力，会经历EMT或者MET转化。第二，人皮肤成纤维细胞一般处于静息状态，通常会在创伤修复时大量增殖，并分泌胶原纤维和胞外基质，参与伤口愈合。而癌细胞时刻处于增殖或转移状态，几乎不分泌胶原纤维和胞外基质。第三，人皮肤成纤维细胞由胚胎时期的间充质细胞分化而来，一般存在于皮肤的结缔组织中，处于间充质状态。而癌细胞种类繁多，来源广泛，有的处于上皮状态，有的则处于间充质状态。因此，癌细胞的诱导分化较为复杂、困难，有待于研究更加简便、普适性强的、有效的方法用于癌细胞向脂肪细胞的诱导分化。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种将癌细胞诱导分化成脂肪细胞的方法，包括以下步骤：(1)将癌细胞于基础培养基中进行培养，待细胞汇合度达80-100％时，进行诱导分化；(2)将步骤(1)的基础培养基换成诱导分化培养基①，培养4-8天；(3)将诱导分化培养基①换成诱导分化培养基②，培养1-4天；(4)换成基础培养基，培养6-12天；其中，所述基础培养基为含胎牛血清、抗生素的高糖DMEM(Dulbecco’smodifiedEaglemedium)培养基；所述诱导分化培养基①为含有地塞米松、胰岛素、罗格列酮和1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的基础培养基；所述诱导分化培养基②为含胰岛素的基础培养基。优选地，所述基础培养基为含5％-20％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的高糖DMEM培养基。优选地，所述诱导分化培养基①为0.5-1μM地塞米松，5-20μg/mL胰岛素，1-2μM罗格列酮，0.2-0.5mM1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的基础培养基。更优选地，所述诱导分化培养基①为1μM地塞米松，10μg/mL胰岛素，2μM罗格列酮，0.5mM1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的基础培养基。在采用诱导分化培养基①诱导分化癌细胞的过程中，按照常规培养细胞的方法，定期进行换液，本专利技术实施例选择每两天换液一次。优选地，所述诱导分化培养基②为含5-20μg/mL胰岛素的基础培养基。更优选地，所述诱导分化培养基②为含10μg/mL胰岛素的基础培养基。本专利技术的上述方法中，诱导分化的环境条件为35℃～37℃，5％CO2。本专利技术一个具体的诱导分化方案为：将癌细胞传代到铺有盖玻片的35mm的培养皿中，加入3mL基础培养基，放在含有5％CO2的细胞培养箱中，37℃培养；待细胞汇合度达到80-100％后，吸掉基础培养基，加入诱导分化培养基①，连续诱导培养4-8天，每两天换液一次；吸掉诱导分化培养基①，加入诱导分化培养基②，诱导培养1-4天；吸掉诱导分化培养基②，加入基础培养基，继续培养6-12天，每两天换液一次。上述方法诱导获得的脂肪细胞属于本专利技术的保护范围。上述方法在通过将癌细胞诱导分化成脂肪细胞而抑制癌细胞增殖、转移中的应用属于本专利技术的保护范围。本专利技术提供了含有地塞米松、胰岛素、罗格列酮、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的组合物在制备将癌细胞诱导分化成脂肪细胞的药物或在制备抑制癌细胞增殖、转移的药物中的应用。上述应用中，先用含地塞米松、胰岛素、罗格列酮、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的组合物诱导分化癌细胞，再用胰岛素诱导分化癌细胞。具体地，将含地塞米松、胰岛素、罗格列酮、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的组合物制成诱导分化培养基①，所述诱导分化培养基①为0.5-1μM地塞米松，5-20μg/mL胰岛素，1-2μM罗格列酮，0.2-0.5mM1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的上述基础培养基；将胰岛素加入上述基础培养基中使胰岛素终浓度为5-20μg/mL，制成诱导分化培养基②。本专利技术方法适用的癌细胞不需经过EMT转化，也不受其状态影响，可以是处于上皮状态的癌细胞，也可以是处于间充质状态的癌细胞。因此，该方法具有普适性。适用的癌细胞包括但不限于HeLa(人宫颈癌细胞)、U2OS(人骨肉瘤细胞)、SW620(人结肠癌细胞)、SW480(人结肠癌细胞)、HCT116(人结肠癌细胞)、HT29(人结肠癌细胞)、A549(人非小细胞肺癌细胞)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞)、HepG2(人肝癌细胞)、T47D(人乳腺癌细胞)细胞系以及分离的原代癌细胞。本专利技术通过上述方法成功将多种癌细胞诱导分化成脂肪细胞。以HeLa细本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种将癌细胞诱导分化成脂肪细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将癌细胞于基础培养基中进行培养，待细胞汇合度达80-100％时，进行诱导分化；(2)将步骤(1)的基础培养基换成诱导分化培养基①，培养4-8天；(3)将诱导分化培养基①换成诱导分化培养基②，培养1-4天；(4)换成基础培养基，培养6-12天；/n其中，所述基础培养基为含胎牛血清、抗生素的高糖DMEM培养基；/n所述诱导分化培养基①为含有地塞米松、胰岛素、罗格列酮和1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的基础培养基；/n所述诱导分化培养基②为含胰岛素的基础培养基。/n
【技术特征摘要】
1.一种将癌细胞诱导分化成脂肪细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将癌细胞于基础培养基中进行培养，待细胞汇合度达80-100％时，进行诱导分化；(2)将步骤(1)的基础培养基换成诱导分化培养基①，培养4-8天；(3)将诱导分化培养基①换成诱导分化培养基②，培养1-4天；(4)换成基础培养基，培养6-12天；
其中，所述基础培养基为含胎牛血清、抗生素的高糖DMEM培养基；
所述诱导分化培养基①为含有地塞米松、胰岛素、罗格列酮和1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的基础培养基；
所述诱导分化培养基②为含胰岛素的基础培养基。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基础培养基为含5％-20％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的高糖DMEM培养基。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导分化培养基①为0.5-1μM地塞米松，5-20μg/mL胰岛素，1-2μM罗格列酮，0.2-0.5mM1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的基础培养基。
4.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：张传茂，王向阳，辛广伟，迟王菲，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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