上一期我们带大家学习了“实验室细胞培养常见五大误区”,今天我们继续给大家罗列五条“常见误区”,不管新手老手都可以“避避雷”。 误区 六 急用血清! 从-20℃拿出来放在室温或者37℃条件下解冻! 正确融解 血清在细胞培养过程中发挥重要作用。 您是否有过:
我们应当: 当我们取出冷冻的血清产品,置于4℃冰箱融解,期间需要均匀摇晃,减少沉淀物的产生,肉眼可观察融解过程中血清颜色的变化,血清的颜色是依据血红蛋白含量不同而变化。 融解后按需分装冻存,避免反复冻融。 若融解后未能及时用完,存储在4℃冰箱的时间也不要过久,质量会下降也容易形成沉淀物。 血清产品如此贵重,请“正确融解”后使用与保存。 误区 七 不同品牌的血清交替使用于常见细胞系, 效果应该不会变化很大! 正确选择 目前国内品牌众多,给广大用户制造了不少“选择困难”。 心中难免产生过一些想法:
这些想法也支撑大家度过漫长的研究岁月。 事实上:
血清的品牌替换或换批次可能给细胞带来的影响:细胞增殖缓慢、细胞形态变化、细胞实验结果不可重复等。请及时做好细胞试用与筛选工作,选择正确的血清开展细胞培养。 血清市场“百花齐放”,请“正确选择”血清产品开展细胞研究。 误区 八 血清灭活后的使用效果更好! 正确使用 新进实验室的小伙伴们都会跟着师兄师姐学习实验知识与技术操作,做一个听话的“宝宝”! 耳边是否有过这样的提示:
首先我们要明确热灭活的目的是去除血清中的补体蛋白,但灭活的同时会导致血清中某些成分被破坏,如氨基酸、维生素、生长因子等,因而出现一些沉淀物析出是属于正常现象。
如果血清的热灭活确实是研究需要,请按照以下程序进行: 从-20℃冰箱取出血清后在4℃条件下融解,融解后再置于56℃水浴锅中水浴30min。 所以,细胞培养中,血清的“正确使用”尤为重要。 误区 九 细胞培养一定要加双抗或三抗,这样才放心! 慎用 这个大家一定不陌生,使用双抗的目的就像我们每天“戴口罩”一样。 所以有了这样的做法:
整个细胞培养过程中涉及到的试剂、耗材、仪器设备、人员操作等都可能成为污染源,无菌意识要铭记于心,杜绝模棱两可。
2017年,美国加州大学的Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上发表文章称:发现双抗的使用会影响人体肝细胞中基因的表达与调控,其中209个基因表达发生改变,特别是与药物和应激反应相关的基因。所以请“慎用”抗生素! 请为细胞健康生长和实验结果准确创造一个良好的实验环境! 误区 十 细胞冻存无保护直接放在-80℃冰箱,无需缓慢降温! 慢冻 经历了细胞分离、传代培养,到最后的细胞冻存仍然不能掉以轻心。 请注意以下行为:
请按照正确的冻存程序,选择状态良好的细胞,合理冻存种子细胞,信息标记清晰,长期保存细胞请置于液氮罐中。
手动降温:4℃ 10 min;-20℃ 30 min;-80℃ 过夜;液氮 所以在细胞冻存操作过程中,请谨记“慢冻”,减少冰晶的迅速形成后对细胞的损伤。 THE END |
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