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实验室细胞培养常见“误区”‖第二弹

 小梦想在努力 2022-12-31 发布于北京

实验室细胞

培养常见“误区”

第二弹

上一期我们带大家学习了“实验室细胞培养常见五大误区”,今天我们继续给大家罗列五条“常见误区”,不管新手老手都可以“避避雷”。

误区 六

急用血清!

从-20℃拿出来放在室温或者37℃条件下解冻!

正确融解

血清在细胞培养过程中发挥重要作用。

您是否有过:

  1. 将冷冻的血清直接放入37℃水浴锅中融解,融解后产生很多絮状的沉淀物

  2. 融解后的血清直接使用,每次使用的时候再融解

  3. 分装的血清用不完直接存储在4℃冰箱,也方便以后使用

  4. 融解后的血清颜色有点暗红,不会质量有问题吧?

我们应当:

当我们取出冷冻的血清产品,置于4℃冰箱融解,期间需要均匀摇晃,减少沉淀物的产生,肉眼可观察融解过程中血清颜色的变化,血清的颜色是依据血红蛋白含量不同而变化。

融解后按需分装冻存,避免反复冻融。

若融解后未能及时用完,存储在4℃冰箱的时间也不要过久,质量会下降也容易形成沉淀物。

       血清产品如此贵重,请“正确融解”后使用与保存。

误区 七

不同品牌的血清交替使用于常见细胞系,

效果应该不会变化很大!

正确选择

目前国内品牌众多,给广大用户制造了不少“选择困难”。

心中难免产生过一些想法:

  1. 血清营养丰富,不同牌子的效果应该差不多

  2. 新血清养细胞不好,提高点浓度应该就可以

  3. 实验室一直用这个品牌的血清,没得问题

  4. 细胞状态不好、增殖慢,提高浓度不行就换个品牌

这些想法也支撑大家度过漫长的研究岁月。

事实上:

  1. 血清为混合物,不同品牌/批次血清质量存在差异

  2. 换品牌/批次需要试用筛选,再囤积足够量

  3. 不同细胞适用血清品质存在差异,可试用筛选

  4. 细胞增殖缓慢需要综合分析原因,及时排除问题

血清的品牌替换或换批次可能给细胞带来的影响:细胞增殖缓慢、细胞形态变化、细胞实验结果不可重复等。请及时做好细胞试用与筛选工作,选择正确的血清开展细胞培养。

       血清市场“百花齐放”,请“正确选择”血清产品开展细胞研究。

误区 八

血清灭活后的使用效果更好!

正确使用

新进实验室的小伙伴们都会跟着师兄师姐学习实验知识与技术操作,做一个听话的“宝宝”!

耳边是否有过这样的提示:

  1. 咱实验室的血清都是灭活后使用

  2. 灭活后有这么多沉淀物,是不是这血清质量不好

  3. 冷冻的血清直接置于56℃水浴锅中灭活

首先我们要明确热灭活的目的是去除血清中的补体蛋白,但灭活的同时会导致血清中某些成分被破坏,如氨基酸、维生素、生长因子等,因而出现一些沉淀物析出是属于正常现象。

  1. 根据研究需要和细胞特性选择合适的血清

  2. 血清灭活后有纤维蛋白等析出,属正常现象

  3. 局部受热不均匀,血清质量严重受损

如果血清的热灭活确实是研究需要,请按照以下程序进行:

从-20℃冰箱取出血清后在4℃条件下融解,融解后再置于56℃水浴锅中水浴30min。

       所以,细胞培养中,血清的“正确使用”尤为重要。

误区 九

细胞培养一定要加双抗或三抗,这样才放心!

慎用

这个大家一定不陌生,使用双抗的目的就像我们每天“戴口罩”一样。

所以有了这样的做法:

  1. 师兄师姐做细胞培养都加1%双抗

  2. 细胞发生污染直接双抗使用量加倍或多倍

  3. 长期使用同种/多种抗生素,细胞应该是百毒不侵

整个细胞培养过程中涉及到的试剂、耗材、仪器设备、人员操作等都可能成为污染源,无菌意识要铭记于心,杜绝模棱两可。

  1. 仔细查询细胞相关培养特性,无菌操作

  2. 做好细胞污染类型的鉴别,有针对性的处理

  3. 长期使用抗生素,容易产生耐药性

2017年,美国加州大学的Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上发表文章称:发现双抗的使用会影响人体肝细胞中基因的表达与调控,其中209个基因表达发生改变,特别是与药物和应激反应相关的基因。所以请“慎用”抗生素!

       请为细胞健康生长和实验结果准确创造一个良好的实验环境!

误区 十

细胞冻存无保护直接放在-80℃冰箱,无需缓慢降温!

慢冻

经历了细胞分离、传代培养,到最后的细胞冻存仍然不能掉以轻心。

请注意以下行为:

  1. 不管细胞状态如何,先冻存再说

  2. 细胞冻存于-80℃冰箱超过半年

  3. 高密度细胞直接冻存单管

  4. 短期内要用细胞,冻存管标记可以简单点或者不清晰

请按照正确的冻存程序,选择状态良好的细胞,合理冻存种子细胞,信息标记清晰,长期保存细胞请置于液氮罐中。

  1. 冻存前的细胞状态很重要

  2. -80℃冻存效果有限,建议长期保存于液氮中

  3. 根据研究需要,合理冻存细胞量便于长期研究

  4. 设备不定期开启,长时间容易遗忘或抹掉

手动降温:4℃ 10 min;-20℃ 30 min;-80℃ 过夜;液氮

       所以在细胞冻存操作过程中,请谨记“慢冻”,减少冰晶的迅速形成后对细胞的损伤。

THE END

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